全省免疫无口蹄疫区 兽医实验室建设及考核认证

<正>通过兽医系统实验室考核和计量认证,是无疫区兽医实验室建设的最低"门槛",是保证兽医实验室达到无疫区建设标准的基础。各级兽医系统实验室承担着大量的动物疫病检测、监测和诊断等任务,实验室的检测结果,是证明区域内无规定疫病的最重要的科学依据,直接关系到全省无疫区建设的成败。一、充分认识无疫区兽医实验室建设的重要意义兽医实验室的建设,是无疫区建设的重要环节,是建立动物卫生监督监管体系和应急管理体     

猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组蛋白的表达及抗虫活性分析

将含有抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因（ScFv）和绿脓杆菌外毒素基因（PE40）的重组质粒pET28．ScFv-PE40转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,表达产物通过SDS-PAGE和westernblot鉴定,其表达蛋白的相对分子量约为68ku,表达量约占菌体总蛋白的13．8％。将融合蛋白通过金属Ni2^＋亲和层析柱纯化后,目的蛋白纯度在95％以上,可溶性蛋白的回收率约为50％,回收量为5mg／L。本研究所进行的纯化重组蛋白的体外杀伤六钧蚴试验表明,重组蛋白对六钩蚴具有较强的杀灭作用,而且与其剂量呈正相关性。     

猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组载体的构建及表达

从绿脓杆菌ATCC27853菌株中提取基因组,PCR扩增PE40基因,与pMD18-T栽体连接并转化感受态大肠杆菌JM109中,构建重组质粒pMD-PE40;经鉴定正确后将PE40基因插入抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因重组质粒pMD-ScFv中,构建重组质粒pMD-ScFv-PE40,经酶切、电泳回收目的片段,并亚克隆到表达栽体pET-28a中,构建重组表达载体pET-ScFv-PE40;鉴定后转化E.coli BL21,IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blotting验证.结果表明,试验成功构建了重组表达载体pET-ScFv-PE40,目的片段约为1800 bp;Western blotting证明重组蛋白具有一定的反应原性,为重组免疫毒素的制备及动物保护性试验奠定了基础.     

抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因的扩增及序列分析

从分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体杂交瘤细胞提取总RNA,以此为摸板,RT-PCR扩增出抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因,琼脂糖凝胶电泳检测显示约350 bp,符合鼠抗体特征.PCR产物与pMD18-T连接后转化JM109,蓝白斑法筛选出阳性重组子.以载体通用引物对阳性重组子进行鉴定,对证明为阳性的重组子测序.结果显示,轻链可变区和重链可变区基因符合鼠抗体轻链可变区和重链可变区基因特征.VH和VL有3个比较明显的CDR区和FR区.     

抗猪囊尾蚴头节特异性单链抗体的构建及克隆

首先对猪囊尾蚴头节特异性单链抗体重链可变区基因(Vh)和轻链可变区基因(Vl)进行酶切鉴定,PCR鉴定以及测序分析,然后采用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术,将重链可变区基因和轻链可变区基因,通过linker链连接成Vh-linker-Vl单链抗体基因(ScFv)。将此基因与pMD18-T载体连接,转化感受态大肠杆菌J M109,从而进一步克隆并对重组载体pMD-ScFv进行鉴定。结果:成功构建并克隆了抗猪囊尾蚴头节单链抗体,为重组免疫毒素ScFv-PE40的构建?表达及活性测定奠定了良好的基础。