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以无菌手术法取健康妊娠期、泌乳期昆明小白鼠的乳腺组织,用胰蛋白酶、胶原酶1分段消化法获得小鼠乳腺细胞。生长培养液为DMEM/F12,含10%胎牛血清,添加胰岛素(5μg/mL)、EGF(5ng/mL)、氢化可的松(1μg/mL)、青霉素(200IU/mL)及链霉素(0.1mg/mL)。从乳腺组织中获得的细胞直接放入-80℃冰箱中进行冻存,冻存液为DMEM/F12,含20%胎牛血清、10%DMSO。用倒置显微镜观察细胞形态,发现乳腺组织消化后即可获得呈圆饼状的上皮细胞;培养过程中,乳腺上皮细胞的形态以鹅卵石型和多角型为主,增殖可形成乳头状结构,称之为乳球体,大量增殖后形成圆顶型结构。细胞核呈圆形或椭圆形,在传代过程中,乳腺上皮细胞可形成岛屿状的闭合型细胞群,边界清晰,细胞之间结合紧密,细胞间呈拉网结构。结果表明:获得典型上皮细胞形态的小鼠乳腺细胞原代培养物,从泌乳期小鼠获得的乳腺上皮细胞传至第1代时无法长成单层;而从妊娠期小鼠获得的乳腺上皮细胞传至第3代时才无法长成单层;冻存后复苏的乳腺细胞在培养过程中仍然具有典型的上皮细胞形态,并且增殖旺盛。 相似文献
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