巨型艾美球虫株间差异表达基因消减文库的构建和分析

为分离鉴定巨型艾美球虫上海株与南通株间免疫原性的差异表达基因,分别以巨型艾美球虫上海株孢子囊cDNA为驱动组,以南通株孢子囊cDNA为试验组,或相反,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过2轮杂交和2次PCR分别构建了2个抑制性消减文库.随机从2个消减文库中分别挑取96个克隆产物,经PCR鉴定上海株和南通株孢子囊消减文库的重组率分别为91%和94%,差异基因片段大小为250～1 000 bp.从每个文库中随机挑取30个阳性克隆测序,并进行同源性比较分析,结果表明:从上海株cDNA消减文库中获得了19个单一有效序列,其中15个为未知序列;从南通株cDNA消减文库中获得了16个单一有效序列,其中13个为未知序列.这些结果将为分离巨型艾美球虫新功能基因和进一步探索球虫抗原变异相关的分子机理奠定基础.     

巨型艾美球虫gam56基因的截短原核表达及其产物的免疫保护效果

为评价gain56基因重组表达产物作为亚单位疫苗预防鸡巨型艾美球虫(E.maxima),感染的效果,以E.maxima NT株配子体总RNA为模板,RT.PCR扩增和克隆gain56基因,选择该基因两段丰富抗原表位的编码区片段.利用原核表达载体pGEX-6P-1在大肠杆菌中进行截短表达.以可溶性的GST-gain56-2融合蛋白为免疫原,设立高、中、低(1.0 mg、0.5 mg、0.25 mg)3个剂量,单独或使用弗氏完全佐剂,于5 d、12 d和19 d对雏鸡进行3次免疫,26 d用5 ×10~4个E.maxima孢子化卵囊进行攻虫,8 d后迫杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率、ACI等指标进行统计分析.结果显示:就相对增重率而言各免疫组比未免疫攻毒组的高27.6%以上,而各免疫组之间差异不显著(p>0.05);就卵囊减少率指标而言,各免疫组较未免疫攻毒组均有不同程度减少,但是均小于75%;就ACI指标而言,各免疫组较未免疫攻毒组均有不同程度增加,以中剂量蛋白佐剂组为最高.GST-gam56-2融合蛋白对于E.maxima感染具有一定的免疫保护效力.