猪细环病毒数字PCR定量检测方法的建立

[目的]实现猪细环病毒(TTSuV)的准确定量检测。[方法 ]根据TTSuV的序列特点,设计特异性引物、探针,建立数字PCR检测技术。对数字PCR反应体系中的引物和探针浓度进行优化,分析方法的灵敏度、特异性,并初步应用于进行临床检测。[结果 ]最终确定TTSuV1a和TTSuV1b数字PCR反应体系中最佳引物浓度均为250 nmol/L,最佳探针浓度均为300 nmol/L,TTSuV1a型和TTSuV1b型灵敏度均可达到单个拷贝数;以猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,结果无交叉反应;批内和批间试验表明,该方法的重复性良好;本实验室留存的92份血清样本的检测结果与其背景信息一致。[结论 ]本研究建立的TTSuV数字PCR法具有特异性强、灵敏度高、检测限低等优点,可用于TTSuV的定量检测。     

刍议采茶服装设计中的美学特征

美是一种综合化的视觉认知,其通过美的形式,使人们在视觉感官中能够感受到必要的美感,对于任何一种服装本身来说,只有诠释了具体美学内涵,并且将本质上的美以一种合理的外在形式,来具体诠释和表达,从而实现整个服装的最美化呈现与表达。本文拟从采茶服装设计过程中的"美学"认知观入手,结合采茶服装的本质特点分析,从而就自身呈现的设计美学、形式上的美学理念以及文化内涵美多个视角认知采茶服装设计中的具体美学特征。     

猪细环病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及应用

为了应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪细环病毒1型和2型,根据猪细环病毒的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。选择猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和重复性;用质粒标准品进行TTSuV1和TTSuV2的PCR-DHPLC检测,灵敏度可达1.0×101拷贝·μL-1。对80份血清样本分别应用实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法及本文所建立的PCR-DHPLC法与进行检测,发现TTSuV1有63份PCR-DHPLC阳性,63份实时荧光PCR阳性,54份PCR-凝胶电泳阳性;TTSuV2有69份PCR-DHPLC阳性,69份实时荧光PCR阳性,56份PCR-凝胶电泳阳性。本试验建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于TTSuV感染的分子流行病学调查。     

鄱阳湖区家禽及野生候鸟禽流感感染情况的调查

2012~2014年,为了调查鄱阳湖地区家禽及野生候鸟禽流感的流行病学现状,以RT-q PCR试验为检测手段,在鄱阳湖区庐山区、湖口县、星子县等10个县的24个乡镇,共采集样品1 281份。其中,野生候鸟16个品种,样品135份,包括粪拭子102份、组织样本33份;家禽样品1 050份,包括粪拭子684份、喉拭子137份、泄殖腔拭子229份;水样96份。结果表明:共检出禽流感H2亚型病毒核酸阳性3个,H9亚型病毒核酸阳性2个。由此推断:鄱阳湖区家禽及野生候鸟现阶段没有感染高致病性禽流感,但存在低致病性禽流感感染的情况。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR-DHPLC检测新技术的建立及应用

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,根据PRRSV GP5基因的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪流感病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性和重复性;对阳性标准品的检测结果表明,所建立的PCR-DHPLC法灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。对16份疑似病料分别应用本试验所建立的PCR-DHPLC法与SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法、病毒培养法进行检测,发现有15份荧光定量PCR阳性,15份PCR-DHPLC阳性,12份PCR-凝胶电泳阳性。结果表明,建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。     

炭疽杆菌双毒力因子荧光PCR检测方法的建立及应用

由炭疽杆菌（Bacillus anthracis）引起的炭疽（anthrax）是严重危害人类和家畜健康的重大传染病。为了提高出入境口岸对不明粉未快件样品的查验效率，防范通过包裹夹带生化武器，本研究使用Taq Man探针技术，建立了针对炭疽杆菌两种毒力质粒pOX1和pOX2的双重荧光PCR检测方法，并对该方法的特异性、灵敏性和稳定性进行了试验。结果显示：本研究建立的炭疽杆菌双重荧光PCR检测方法具有较强的特异性，只特异性检出炭疽杆菌pOX1和pOX2，而与金黄色葡萄球菌等19种对照病原菌均无交叉反应；灵敏度与单重荧光PCR方法相近，最低检测限可达10 copies/μL；稳定性好，反应体系低温保存2、4、6、8个月后，检测阳性质粒的Ct值和峰值相差不大。应用该方法检测600份猪牛羊组织样本，均未检出炭疽杆菌阳性核酸。本研究建立的双重荧光PCR检测方法为炭疽杆菌的快速检测提供了技术支撑。