胆汁酸膜受体TGR5真核表达载体的构建及在细胞中的表达

试验旨在构建胆汁酸膜受体TGR5真核表达载体,转染293T细胞并在其中表达。用RT-PCR技术从胎盘组织中得到TGR5基因,克隆至真核表达载体pCMV-EGFP中。双酶切和测序鉴定正确后,将pCMV-EGFP-TGR5瞬时转染293T细胞,并采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测TGR5的表达。结果显示,本试验构建了TGR5真核表达载体pCMV-EGFP-TGR5;转染293T细胞后,荧光显微镜观察到绿色荧光表达;实时荧光定量PCR检测TGR5表达量显著增加;Western blotting结果显示有目的蛋白表达。结果表明,真核表达载体pCMV-EGFP-TGR5构建成功,转染293T细胞后在基因、蛋白水平上均表达TGR5受体。     

牛磺胆酸对TGR5介导的HEK-293T和NR8383细胞cAMP的影响

目的:研究牛磺胆酸(Taurocholic Acid,TCA)对瞬转TGR5受体的HEK-293T及NR8383细胞的c AMP含量的影响。方法:采用MTT法测定TCA对细胞毒性范围,采用ELISA法测定TCA对细胞内c AMP含量的影响。结果:TCA对瞬转TGR5受体的HEK-293T细胞产生的c AMP含量呈剂量依赖性增加(P<0.05),TCA对瞬转TGR5受体的NR8383细胞产生的c AMP含量显著增加(P<0.05)。结论:TCA对TGR5介导的两种细胞的c AMP的含量均有显著性提高。