猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

为体外表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）糖基化囊膜蛋白GP5,以及制备其多克隆抗体,以PRRSV PC疫苗株RNA为模板,应用RT-PCR扩增GP5基因,并克隆至原核表达载体pET-32a（+）,构建重组表达载体pET-32a-GP5。经过酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,加入IPTG低温诱导表达。使用亲和层析法纯化PRRSV GP5蛋白。然后将纯化的蛋白免疫北京大耳白兔制备多克隆抗体,并进行酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光分析（IFA）。结果显示,表达的PRRSV GP5原核蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量大约30 kDa;制备的GP5蛋白多克隆抗体ELISA效价可达1:64 000;IFA检测显示,制备的多克隆抗体能够识别PRRSV。重组PRRSV GP5蛋白及其多克隆抗体的成功制备为PRRSV血清学检测方法的建立提供了良好的生物学材料。     

14种中药及其组方对临床常见致病菌的抑菌作用

观察了诃子、黄连、黄芩、五味子、紫花地丁、金银花、栀子、柴胡、大黄、郁金、穿心莲、白头翁、陈皮、苦参等14味中药及其组方的水煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、巴氏杆菌等临床常见致病菌的体外抑菌作用,以及对鸡体内大肠杆菌-巴氏杆菌联合攻毒保护作用的差异。结果表明:诃子、五味子、黄连、黄芩、金银花、柴胡对大肠杆菌有明显抑制作用;黄连、黄芩、诃子、大黄、五味子、金银花对巴氏杆菌抑制作用较好;黄芩、大黄、诃子、黄连、五味子对金黄色葡萄球菌体外抑菌作用明显。由上述药物为主药组成的中药方剂(方1~方3)的体外抑菌作用弱于单味药,但对体内大剂量细菌攻毒的保护作用强于单味药,且以方1、方2作用更好。