驴骨胶原肽制备方法的初步建立及分子量检测

旨在建立驴骨胶原肽的制备方法,并对其分子量进行检测。以牛血清白蛋白为对照品,建立多肽含量和OD_{650 nm}值的标准曲线方程;模拟人工胃液、肠液环境,以驴骨胶原肽一级、二级酶解产物多肽含量为评价指标,在筛选胃蛋白酶和胰蛋白酶最佳酶解时间和加酶量的基础上,采用二级生物酶解技术制备驴骨胶原肽;应用SDS-PAGE法对制备的驴骨胶原肽的分子量进行检测。结果表明,建立的多肽含量和OD_{650 nm}值标准曲线方程为：y=0.163 9x-0.149 6,R²=0.998 9;应用胃蛋白酶进行一级酶解驴骨胶原肽的最适反应条件为：pH值在2.5~3.0,加酶量2.0%、酶解时间2.0 h;应用胰蛋白酶进行二级酶解驴骨胶原肽的最适反应条件为：pH值在7.5~8.0,加酶量2.0%、酶解时间2.5 h;经SDS-PAGE法检测,根据上述最适反应条件制备的驴骨胶原肽的分子量在10 kDa左右。研究结果为开发适合人体吸收分子量的驴骨胶原肽原料以及后续产品的研发提供了技术参考。     

奶牛输卵管平滑肌前列腺素类受体的分析研究

本研究选用了前列腺素类化合物(Prostaglandin E2（PGE2）、Prostaglandin F2α（PGF2α）、Prostaglandin D2（PGD2)）和受体选择性激动剂（Butaprost、U-46619）,用多道生理信号采集系统测定其对体外分离的奶牛输卵管峡部及壶腹部平滑肌收缩的影响,以此初步揭示受体的种类。结果发现,PGE2和Butaprost均抑制了奶牛输卵管峡部、壶腹部的自发性收缩运动,呈现明显的浓度依存性舒张反应;PGF2α在高浓度(1～10 μmol/L)下,使峡部和壶腹部的自发性收缩运动有了显著增强;PGD2在低浓度时轻微抑制了壶腹部平滑肌的收缩,但在高浓度(1～10 μmol/L)时加强了峡部和壶腹部平滑肌的收缩;U-46619从低浓度便引起了输卵管峡部和壶腹部平滑肌的强烈收缩。结果表明,EP4、EP2、FP、DP和TP受体同时存在于奶牛输卵管平滑肌上,能与内源性前列腺素类结合并参与调节输卵管平滑肌的自发性收缩。     

雌激素对荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E2受体EP2和EP4 mRNA表达的影响

本实验旨在探讨奶牛输卵管上皮细胞中是否存在前列腺素E2受体EP2和EP4,且该受体mRNA表达是否受雌激素(E2)的调控。将前列腺素类化合物PGE2和受体选择性激动剂(butaprost)按10-9mol/L-10-5mol/L的浓度分别作用于体外培养的奶牛输卵管上皮细胞,应用Elisa方法检测细胞中第二信使cAMP量的变化。然后,将E2作用于体外培养的奶牛输卵管上皮细胞,应用real time RT-PCR技术检测EP2和EP4受体mRNA表达量的变化。Elisa实验结果显示,前列腺素类化合物PGE2和受体选择性激动剂(butaprost)可引起奶牛输卵管上皮中cAMP量的变化,且cAMP量具有对PGE2和butaprost浓度依存性的变化规律,表明奶牛输卵管上皮细胞中存在前列腺素受体EP2和EP4。Real time RT-PCR实验结果表明,奶牛输卵管上皮细胞中存在前列腺素受体EP2和EP4,且E2对EP2和EP4受体mRNA的表达具有调控作用,低浓度(10-12mol/L)可提高该受体mRNA的表达量。     

羊胎盘转移因子注射液对大白鼠和幼犬营养作用的试验研究

[目的]通过研究羊胎盘转移因子注射液对健康大白鼠、人工创伤模型大白鼠和健康杂种幼犬的血浆总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和血红蛋白(Hb)含量的影响,探讨供试药品对受试动物的营养作用,进而评估其临床营养功效。[方法]将24只健康大鼠和16只健康杂种幼犬分别随机分为试验组和对照组,为试验组大鼠和试验组幼犬灌服供试药品,并检测给药前后血浆TP、ALB和Hb含量的变化。将45只健康大鼠人工创伤造模后分成低剂量试验组、中剂量试验组和对照组3个组,试验组大鼠使用不同剂量供试药品,于术后3、7、14d测定血浆TP、ALB、SOD和NO含量的变化。[结果]①为健康大鼠灌服供试药品后,与对照组相比,试验组健康大鼠血浆TP、ALB含量显著(P0.05)提高。②为健康杂种幼犬灌服供试药品后3d,与对照组相比,试验组健康杂种幼犬血浆中TP、Hb含量均极显著(P0.01)提高,ALB含量显著(P0.05)提高。③为人工创伤模型大鼠灌服供试药品后,与对照组相比,各试验组术后3d血浆TP、ALB、NO含量均提高;术后7 d中剂量组血浆TP、ALB、NO含量均极显著提高(P0.01),低剂量组显著提高(P0.05);术后14 d,试验组血浆TP、ALB含量恢复到术前,试验组血浆NO含量升高,无显著差异(P0.05)。与对照组相比,术后3 d和7 d,各试验组血浆SOD含量升高,无显著差异(P0.05);术后14d,各试验组SOD含量升高,中剂量组显著(P0.05)升高。[结论]羊胎盘转移因子注射液可显著改善健康大鼠和健康杂种幼犬的营养状况,促进术后大鼠创伤恢复和幼犬的生长发育,提高机体抗病能力,在临床上兼具改善营养和提高免疫力的作用。     

雌激素对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素E2和F2α合成酶mRNA表达的影响

为了揭示雌激素(estrogen,E₂)对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E₂合成酶(PGES)和前列腺素F_2α合成酶(PGFS)mRNA表达的影响,探讨E₂对奶牛输卵管生殖生理的调节作用,本试验采用了体外培养荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞技术,分不同时间(0、2、4、8、16、24和48 h)和不同浓度(10^-12、10^-11、10^-10、10^-9 mol/L)添加雌激素E₂(以不加雌激素作空白对照),采用荧光定量PCR 技术检测PGES和PGFS mRNA表达。不同浓度的E₂或同一浓度不同刺激时间的E₂均能增加PGES的表达,但4 h浓度为10^-10 mol/L时与空白对照相比差异极显著(P<0.01),而PGFS在24 h添加浓度为10^-12 mol/L E₂时与空白对照相比差异极显著(P<0.01)。试验结果表明,E₂对培养的奶牛输卵管上皮细胞PGES和PGFS mRNA的表达有促进作用,说明雌激素E₂对前列腺素酶PGES和PGFS mRNA的表达具有调控作用。     

17β-雌二醇对体外培养牛输卵上皮细胞中环氧合酶-2的表达影响

目的:阐明17β--雌二醇(17β-estradiol,E2)对体外培养的奶牛输卵管上皮细胞(bovine oviduct epithelialcells,BOECs)中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达的影响.方法:分离培养BOECs,建立BOECs培养体系作为体外试验模型,分别在培养液中添加10 pg/mL的E2分别培养2h、4h、6h,提取细胞总RNA及细胞总蛋白,利用实时荧光定量PCR,Western blot等实验技术检测COX-2mRNA和蛋白的表达量.结果:输卵管上皮细胞的COX-2基因表达随添加E2培养液增加2h、4h明显高于对照组.结论:试验数据显示在体外培养的BOECs中E2影响牛输卵上皮细胞中COX-2的表达.     

羊胎盘转移因子注射液非特异性免疫调节作用的研究

为探讨羊胎盘转移因子注射液(goat placental transfer factor injection,GPTF)对动物非特异性免疫功能的影响,采用巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、碳廓清试验以及诱导靶细胞释放免疫介质试验,评价羊胎盘转移因子注射液对动物非特异性免疫调节的作用。结果显示,羊胎盘转移因子注射液具有促进巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能、提高受试小鼠免疫系统廓清指数和吞噬指数以及增加巨噬细胞一氧化氮(NO)和白细胞介素-1(IL-1)分泌量的作用。试验结果表明,羊胎盘转移因子注射液具有增强动物机体非特异性免疫力的作用。