虹鳟Ⅰ型干扰素基因的表达与纯化

为了获得能用于抗虹鳟(Rainbow trout,学名,Oncorhynchus mykiss)病毒性疾病生物制剂开发的高纯度Ⅰ型干扰素(rtIFN3)蛋白,克隆了虹鳟rtIFN3,构建了pET21 a-rtIFN3/BL21 (DE3)原核表达与发酵系,并对rtIFN3进行了表达.重组的rtIFN3分子质量约18.5 ku,以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白量的16％.随后,提取2L发酵瓶的包涵体蛋白,经变性与复性后,再经分子筛和阴离子交换层析进行纯化.纯化后,rtIFN3 SDS-PAGE电泳结果表明蛋白纯度达98％,复性率为3％.本研究获得的高纯度复性蛋白为生物制剂的研制提供了材料.     

创新方法在兽医技术方面的应用

创新方法是技术和产品创新的一种重要方法,已在农机装备、农产品加工等农业领域成功的进行了应用。为了探索创新方法能否应用于兽医研究领域,能否为解决技术难题提供创新资源,本研究以TRIZ为例进行了创新方法在兽医技术方面的初步应用。结果表明：创新方法能够为兽医技术问题的解决提供全新的思路和方案,方案符合技术发展路径,具有良好的应用前景,方案同时能够指出技术再创新的关键,为技术的持续进步奠定了坚实基础。可以预见,创新方法与兽医领域的全面融合能够提高兽医行业的自主创新能力,推动技术和产品的创新,促进产业的持续发展。     

中国传统中兽医创新工具的应用研究

创新工具是中国传统中兽医学科技发展的核心,对其进行系统梳理和应用研究能够为现代中兽医的发展提供创新思路。笔者通过对中国传统中兽医形成和发展历史的梳理,对工具的创新演变及其对学科发展的推动作用进行了挖掘与分析,并探讨了历史成就对现代中兽医发展的启示。结果表明,作为中间杠杆,创新工具有力的撬动了传统中兽医发展的历史跃迁,其中蕴含的创新思想对现代中兽医的发展仍具有重要的启示作用。通过对中国传统中兽医工具创新历史的梳理和研究,彰显了中国中兽医独特的智慧和创造力,深刻揭示了创新方法在科学进步中的推动力。     

基于荧光显色的IBV LAMP检测方法研究

【目的】建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒（IBV）环介导等温扩增（LAMP）检测体系,为IBV的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】根据NCBI中收录的IBV 5a+5b基因的8个区域设计了3对LAMP引物,通过对反应体系各组分和条件的优化,建立IBV LAMP检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用SYBR Green I和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂,对IBV LAMP检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和PCR方法对临床送检的60份样品同时进行检测,比较2种方法的阳性检出率。【结果】成功建立了IBV LAMP检测方法,该方法能够在等温（63 ℃）条件下1 h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低可以检出1拷贝/μL的阳性重组质粒,比普通PCR方法敏感100倍,而对其他病毒检测结果均为阴性。应用SYBR Green I和钙黄绿素/锰离子显色时,阴阳性样品均有强烈的颜色对比,其中0.05 mmol/L钙黄绿素与0.6 mmol/L锰离子混合液可以用于LAMP扩增产物的判断,其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中,LAMP和PCR方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】建立了基于荧光显色的IBV LAMP检测方法,该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。     

中国鲤鱼春季病毒血症毒株糖蛋白基因的亚克隆表达与纯化

为了控制一类传染病-鲤鱼春季病毒血症(SVC),本文亚克隆了SVC中国株糖蛋白基因(SVCV-C1 G),并采用pET21a-SVCV-C1 G/BL21(DE3)表达系进行了表达。随后,纯化了SVCV-C1 G蛋白,纯化蛋白分子量为49.5 kDa。SVCV-C1 G蛋白由442个氨基酸组成,与其他弹状病毒糖蛋白的同源性在18.4%~99.0%。系统进化树显示,SVCV-C1 G属于Ia亚型。研究结果为进一步研制SVC基因工程疫苗奠定了基础。