家蚕孵化酶样基因BmHEL的原核表达及蛋白纯化与功能鉴定

孵化酶(hatchingenzyme,HE)是后生动物卵孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。在已完成全长967bp的家蚕孵化酶样基因(BmHEL)克隆及其转录特性分析的基础上,研究了该基因在原核表达系统的表达、产物纯化及其对家蚕卵壳的降解功能。以全长BmHEL质粒DNA为模板,用PCR方法分别获得了该基因的开放阅读框(BmHELORF,885bp)、缺失信号肽编码区(BmHELa,834bp)和推测成熟酶功能编码区(BmHELb,624bp)的3个片段,并亚克隆入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行表达。表达的3种外源蛋白均以包涵体形式存在,获得含有6×His-Tag标签的融合蛋白,其分子质量分别为33.4、31.8、24.0kD。通过Westernblot方法检测到了用Ni-NTA亲和层析柱纯化的目的蛋白。纯化复性后的3种孵化酶对家蚕卵壳底物有一定降解活性,其中BmHELORF的活性最高,BmHELb的活性最低。在pH7.1反应条件下3种酶的活性比pH9.5时高。研究结果在蛋白质水平上进一步证实家蚕孵化酶样蛋白参与了蚕卵孵化这一重要生命过程。     

柞蚕孵化酶样基因的全长cDNA克隆及表达特征分析

孵化酶是后生动物卵孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。基于生物信息学和RACE方法,从柞蚕胚胎中克隆了一个998 bp的孵化酶样基因全长cDNA,命名为ApHEL(GenBank登录号:JN205047)。ApHEL由15 bp 5'-UTR,98 bp 3'-UTR和885 bp ORF组成。ORF编码294个氨基酸残基,预测蛋白分子质量为33.51 kD,等电点为5.50。在ApHEL N-端存在16个氨基酸的信号肽。ApHEL蛋白酶功能区中含有锌结合序列(HEWMHILGFLHMQSTHNR)和Met-转角基序(YDYVSCLHY)等孵化酶保守功能区域。ApHEL与其他物种孵化酶氨基酸序列的相似度为30.0%～85.0%。基于孵化酶氨基酸序列的进化分析表明,柞蚕、家蚕、库蚊和果蝇聚为一类,亲缘关系较近。ApHEL在早期胚胎中没有转录,至催青第6天开始转录并维持较低水平,在催青第9天剧增至最高值直至孵化,显示ApHEL在柞蚕卵孵化过程中起重要作用。ApHEL在5龄期幼虫的中肠组织中特异性表达,暗示ApHEL可能还有其他生物学功能。     

犬用恩诺沙星口腔崩解片的处方研究

为了将动物专用抗菌药恩诺沙星制成犬用新剂型口腔崩解片,试验选用不同崩解剂利用粉末直接压片法制备恩诺沙星口腔崩解片,检测崩解时限、硬度、脆碎度、药物含量等指标,筛选出最优处方。结果表明:最优处方为5%恩诺沙星原料药、31%微晶纤维素、27%乳糖、27%甘露醇、8%羧甲基淀粉钠和2%微粉硅胶。根据最优处方制备的口腔崩解片崩解时限约为20 s,其他各项指标满足要求,重现性良好。     

电动汽车电池箱检测工装的结构设计

针对目前电动汽车动力电池箱均采用人工检测且检测时不匹配电池或载重块的实际情况,提出了一种全自动化的电池箱检测工装,并详细陈述了检测工装的设计过程及典型方案,通过分析各个方案的优缺点,最终设计出了一种通用的自动化电池箱检测工装;该检测工装实现了电动汽车电池箱自动化检测与评估,不仅减轻了工人的劳动强度,提高了产品检测的可靠性、可信性和电池箱出厂合格率,工作效率也得到了很大的提升,为行业填补了空白。     

鲁南地区温室切花菊‘优香’栽培与加工技术

探讨了鲁南地区温室种植夏菊品种‘优香’的栽培技术，详细介绍了整地、定植、田间管理和病虫害管理等栽培技术，并对切花菊加工技术及加工要点进行介绍，以期为该地区切花菊生产和推广提供参考。