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农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)VirD2蛋白具有与单链T-DNA(ssT-DNA)共价结合并将其转运至植物细胞核,将外源基因高效整合进核基因组的功能;如果将该蛋白改定位于质体,则有可能利用其将外源基因携带进质体,建立质体转化新方法.本研究对VirD2蛋白的定位信号进行了改造,采用重叠延伸PCR突变技术对Vir2的N端核定位信号(NLS)编码序列进行点突变,对C端编码序列实施缺失突变,并在合成的突变VirD2(mVirD2)基因3’端连接上增强绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因,在其5’端加上或不加源自拟南芥(A rabidopsis thaliana)冷调节基因(AtCOR15A)的质体定位信号肽编码序列,分别构成pt-mVirD2-eGFP和mVirD2-eGFP嵌合基因,由CaMV 35 S启动子控制,经农杆菌介导整合进烟草(ic otiana tab ac um)核基因组.荧光检验显示,mVirD2带质体定位信号时绿色荧光集中于叶绿体,mVirD2不带质体定位信号时绿色荧光弥散在细胞质中,且两者的细胞核均无荧光,表明pt-mVirD2-eGFP嵌合基因表达的蛋白具有质体定位特性,并失去了核定位能力.该结果为今后探讨利用pt-mVirD2融合蛋白将外源DNA主动定向牵引进质体,实现质体高效转化研究提供基础资料. 相似文献
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新田县金陵水库是一处拥有养鱼水面3100亩的中型水库。在发展渔业上,70年代由水库管理所和当地社队负责人共同管理水库渔业,年产成鱼均在3万公斤以上,渔业产值可达6万多元,占水库总收入的70％。1981年以后改由水库管理所独家经营,因水库跨县、跨乡,沿库群众纷纷下库偷鱼、炸鱼而无法制止,导致成鱼产量急剧下降。1990年共投放15厘米以上的大规格鱼种5万尾,年产鲜鱼仅600公斤。针对这一现状,县、乡级领导非常重视水库的渔业开发,决定改变由水库管理所单一经营的渔业责任制,把水库承包给周围 相似文献
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