斑点免疫金银染色技术检测鸡传染性法氏囊病毒的研究

本研究成功建立了检测鸡传染的氏囊病毒抗原的斑点－免疫金银染色技术，并确定了操作流程的最佳试验条件。应用该法对纯化ＩＢＤＶ抗原的最低检出量为０．１９５３ｎｇ／点，其敏感性为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的８倍。特异性阻试验和交反应试验证明Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ具有较特异性。     

斑点免疫金银染色技术检测鸡传染性法氏囊病毒的研究

本研究成功建立了检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗原的斑点—免疫金银染色技术（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ），并确定了操作流程的最佳试验条件。应用该法对纯化ＩＢＤＶ抗原的最低检出量为０．１９５３ｎｇ／点，其敏感性为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的８倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ具有较高的特异性。Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５４份自然感染法氏囊样品检测的阳性率为９６．３％和９２．５％（χ２＝３．１１７９，Ｐ＞０．０５），统计学分析两者无显著差异。研究表明本法具有敏感、特异性强、经济、安全等优点，可用于ＩＢＤＶ感染的特异诊断。本研究为免疫金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究打下了基础     

一株引起坛紫菜绿斑病病原的分离鉴定及致病性研究

为了明确引起坛紫菜绿斑病的病原,对2012年发生在福建省莆田养殖海区坛紫菜叶状体绿斑病开展了病原的分离鉴定和致病性研究。利用2216E海水培养基平板,从患病藻体分离得到一株优势细菌X5;在实验室条件下将X5进行回接感染实验,在显微镜下观察到坛紫菜叶状体发生组织病理变化,出现绿斑病症状:感染初期出现黄绿色小斑点,病斑逐渐扩大出现空洞,最后导致紫菜叶片流失;用浓度为10⁴~10⁸ cfu/mL的X5感染坛紫菜时,在7 d内引起紫菜出现10%~100%病斑面积,这些结果表明X5为坛紫菜绿斑病的病原。利用生理生化和多基因序列分析方法对X5进行鉴定,结果显示该菌为革兰氏阴性菌,大小为0.6 μm×0.4 μm~1.0 μm×0.4 μm,无鞭毛,在温度4~42℃、盐度50~150、pH6~10范围内生长,最适生长温度为16℃,最适生长盐度为50,最适pH为7,对甲硝唑、林可霉素和青霉素耐药,对25种抗生素敏感,Biolog和API ID-32E细菌鉴定系统的结果显示X5为弧菌属细菌(Vibriosp.);基于多基因序列(16S rRNA,rpoA,recA,pyrH)构建的系统进化树分析显示,X5与V.casei、V.litoralis、V.rumoiensis聚为一支,进化距离为0.095~0.108,这些结果说明X5为弧菌属的一个新种或是V.casei、V.litoralis、V.rumoiensis之一的一个新亚种。本研究报道了弧菌X5能够引起坛紫菜绿斑病,为紫菜流行病学及疾病防治提供了理论支撑。     

养殖裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)疥疮病病原菌的分离与鉴定

裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)是一种名贵的冷水经济鱼类,已在我国北方地区开展小规模的工厂化繁育和养成.目前,我国关于裸盖鱼的病害研究仍是空白.本研究对山东烟台一养殖场自然发生疥疮病的裸盖鱼进行了病原分析,从发病鱼体内分离得到形态一致的优势菌株,命名为AF-1,并对其进行了致病性检测、菌种鉴定及药物敏感性研究.人工感染实验证明,AF-1对裸盖鱼有致病性,呈现症状与自然发病状态一致;结合形态观察、革兰氏染色、生理生化特征、16S rRNA和gyrB基因序列进化树分析,将AF-1鉴定为杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida);药物敏感性实验结果显示,AF-1对青霉素、阿莫西林、头孢噻吩等13种抗生素具有耐药性,对氟苯尼考、氟甲喹等16种抗生素敏感.综上所述,本研究首次报道了我国养殖裸盖鱼感染杀鲑气单胞菌病例,为裸盖鱼养殖过程中的疾病防控和疫苗开发提供了参考.     

一起条斑紫菜拟油壶菌病的诊断

赤腐病(red rot disease)和拟油壶菌病(Oplidiopsis disease)是海上栽培紫菜(Pyropia)的主要病害,常引起紫菜大面积病烂。2019年1月江苏省盐城市大丰区某条斑紫菜(Pyropia yezoensis)栽培海区有134 hm2发生了紫菜病烂,本研究对该起病烂进行了病害调查和病原鉴定。结果显示,患病紫菜的病症与拟油壶菌病一致,主要表现为发病初期,在叶片边缘、基部和中部出现粉红色的病斑,随着病程发展,病斑逐渐褪色并扩大;发病后期,整个叶片颜色变浅,叶片组织溃烂脱落;在显微镜下可观察到紫菜细胞内寄生1~4个圆球状菌体,菌体内有多个油滴状物质。以病烂紫菜叶片或其匀浆液为感染源,分别在10℃和20℃条件下进行人工感染实验,二者均能使正常紫菜出现拟油壶菌病的病症。对现场采集及人工侵染后的病烂紫菜疑似病原进行cox1基因测序和系统发育学分析。研究表明,所测cox1基因均与紫菜拟油壶菌(Oplidiopsis porphyrae、O. pyropiae、O. porphyrae var. koreana)聚为一支,相似度为100%。综上所述,该起条斑紫菜的病烂由紫菜拟油壶菌(Oplidiopsis sp.)引起。     

发病鲆鲽类分离菌株的16S rRNA基因测序分析

细菌性疾病是中国海水养殖鲆鲽类的主要病害,为全面了解病原菌种类,本研究对1999~2012年从山东、江苏、河北、天津等沿海地区养殖场发病鲆鲽鱼类中分离得到的124株优势菌株进行了16S rRNA基因测序和系统发育学分析。将基因序列与GenBank核酸序列数据库进行相似度比对分析,结果显示,有83株与弧菌属(Vibriosp.)细菌相似度最高,11株与气单胞菌属(Aeromonas sp.)细菌相似度最高,4株与爱德华氏菌属(Edwardsiella sp.)细菌相似度最高,26株为其他15种属的细菌。根据系统发育学分析结果,进一步将66株菌鉴定为16个种,优势种为溶藻弧菌(V.alginolyticus)、哈氏弧菌(V.harveyi)、鳗弧菌(V.anguillarum)、杀鲑气单胞菌(A.salmonicida)和迟缓爱德华氏菌(E.tarda)。选择其中的9株鳗弧菌和4株迟缓爱德华氏菌进行人工感染实验,结果显示,其中7株鳗弧菌和3株迟缓爱德华氏菌对大菱鲆(Scophthalmus maximus)有较强的致病性。研究结果可为阐明中国海水养殖鲆鲽类的流行病发生历史、病原种类、病原监测及疾病控制提供重要参考。     

细菌糖蛋白对螯虾免疫因子的影响

实验检测了气味黄杆菌的胞外糖蛋白对克氏原螯虾（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ）的几咱非特异性免疫因子－凝集素、酚氧化酶、溶菌、抗菌和超氧化物歧化酶等活力的影响。注射１０ｍｇ糖蛋白后,实验组敖蛳主血清的免疫因子活力均高于对照组,凝集素活力在第１～４天最高;酚氧化酶在第１～５天维持较高活力,最大活力在第２天,溶菌、抗菌活力在第１～６天维持较高水平,分别在第３天、第２天达到最大。与对照组相比,实     

虾池有机污染物降解细菌的筛选

在实验室条件下对612株海洋细菌和10株海水驯化淡水菌进行筛选,检测其快速降解水体中富营养有机物的能力。利用对虾饵料培养基、BOD仪、胞外酶检测等方法进行筛选,最后筛选到10株对富营养有机物具有 较高降解性能的细菌。所有的细菌均能产生明胶酶和脂酶（Tween-80),其中9株细菌能产生淀粉酶,8株产生卵磷脂酶,2株产生酪蛋白酶,1株产生褐藻胶酶。通过测量BOD来衡量10株细菌利用对虾饵料的效果,2天时能消化46.6%-59.5%的对虾饵料,5天时能消化50.8%-70.2%的对虾饵料。用常规生理生化方法将细菌鉴定到属,其中3株为弧菌属细菌（Vibrio spp.),3株为假单胞菌属细菌（Pseudomonas spp.),2株为发光杆菌属细菌（Photobacterium spp.),1株为气单胞菌属细菌（Aeromonas spp.),1株为枯草杆菌（Bacillus subtilis)。     

细菌QJ2对对虾病原性哈维氏弧菌的拮抗作用

对气味黄杆菌(Flavobacteria ordoratum)QJ2及其去细胞上清液(CFS)对对虾病原性哈维氏弧菌(Virio harveyi)Z3G2、E022的拮抗作用进行了研究.QJ2的CFS对病原菌表现显著的拮抗性能,在6h内使数量为105 ～106cfu@mL-1的病原菌Z3G2、E022均降为0.经热、酸碱、蛋白酶处理的CFS,抑菌活性均有不同程度下降,结果为经60℃处理60min的CFS,经6h使Z3G2细菌数降为0,经15min使E022数量降为最低,为初始菌数的 63.0%经100℃处理10min,CFS使Z3G2和E022数量分别在1h和15min降为最低,各为初始菌数的23.7%和 72.1%;经pH4作用30min,CFS使Z3G2和E022数量分别在15min和1h降为最低,各为初始菌数的88.3%和 15.9%,而经pH12处理30min后,CFS没有使病原菌数下降,但使病原菌以比对照组细菌低的速率缓慢上升; 经蛋白酶K于37℃作用60min后,CFS在15min时使Z3G2和E022数量降为最低,各为初始菌数的15.0%和 66.1%.在人工水体中,QJ2活菌对病原菌也具有显著的拮抗性能,在24h内使Z3G2、E022数量下降到最低值,各下降了1.6、2.4 Log1o数量级.结果表明QJ2产生的抗性物质为细菌素,对病原性哈维氏弧菌具有良好的拮抗作用.     

以免疫荧光染色法快速诊断鸡传染性支气管炎病毒

以免疫荧光染色法快速诊断鸡传染性支气管炎病毒利用鸡胚气管环培养（ＴＯＣ）是分离临诊材料中传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）最有效的方法。利用免疫荧光（ＩＦ）染色确定ＴＯＣ中的ＩＢＶ，以１９－２０日龄ＳＰＦ鸡胚气管切成６００μｍ厚的环，ＩＢＶ在ＴＯＣ传代多次...