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为了探究瘦素基因(LeptinB, LepB)在斑马鱼肝脏细胞系(ZFL)低温应激中的作用,本研究根据鳞头犬牙南极鱼(Dissostichus mawsoni) LepB基因(DM-LepB)编码的氨基酸序列,克隆到构建的pTOL2-actin-EGFP质粒中(启动子为斑马鱼的β-actin)。选取EcoRⅠ和BamHⅠ为限制酶,设计构建了pTOL2-LepB+HIS-EGFP表达载体,并转染至ZFL细胞中。选择致死温度10 ℃进行实验,采用流式细胞术检测了低温胁迫下细胞的存活率,使用增强型CCK-8试剂盒检测了低温条件下细胞的生长增殖情况,使用荧光探针DHE检测了细胞活性氧(ROS)含量。结果显示,LepB基因的过表达能有效减少细胞ROS的产生,减轻细胞凋亡以应对低温胁迫。分析还显示,DM-LepB的过表达也有利于维持低温刺激下的胞内ATP水平与线粒体状态,有效减轻低温刺激对细胞的凋亡和坏死作用,对细胞冷应激起到保护作用。采用油红O染色和甘油三酯(TG)实验检测发现,DM-LepB基因能减缓低温刺激时细胞脂质的消耗,较多的脂质保留可减弱低温刺激对细胞的伤害,使得细胞能更好地抵抗低温损害。研究结果为揭示南极鱼类的低温适应分子机制提供了基础资料。 相似文献
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为阐明黄条鰤幼鱼摄食消化特性，构建最佳胃排空数学模型，确立最适摄食投喂间隔，实验检测了黄条鰤幼鱼[(63.96±5.63) g]胃排空过程中内容物质量、肝脏和肠道中消化酶活性变化，分析了垂体中摄食调控相关基因的表达，比较了线性模型、平方根模型、立方模型3种数学模型对胃排空曲线的拟合程度。结果显示，黄条鰤在摄食后瞬时胃内容物湿重呈阶段性降低，18 h后降为0，属于直线下降型胃排空类型。胃排空过程中，肝脏淀粉酶、脂肪酶和糜蛋白酶活性呈先上升后下降、随后又上升接着下降的“M”型变化趋势，淀粉酶活性在摄食后0～6 h显著上升，脂肪酶和糜蛋白酶活性在0～9 h显著上升。三种酶活性在9～12 h均呈显著下降趋势，在15～18 h显著上升，且在18 h活性达到最高；肠道中的淀粉酶在0～6 h显著上升，随后下降，9～12 h呈上升趋势，12 h活性达到最高，随后逐渐下降，其脂肪酶和糜蛋白酶活性则是在摄食后0～12 h显著上升，12 h活性达到最高，随后逐渐下降。神经肽Y (npy)和食欲素(ore) mRNA表达水平呈先上升后下降趋势，npy在摄食后12～15 h内表达水平显著上升，ore在9～15 ... 相似文献
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