粤东地区橄榄种质资源遗传多样性的ISSR分析

该研究在于分析粤东地区橄榄种质资源的遗传多样性,从而为橄榄的保护和研究提供依据。利用ISSR分子标记对64份橄榄种质进行遗传多样性分析。共扩增得到128条谱带,其中多态性条带99条,多态性比率为77.34%。平均观察等位基因数为1.7734±0.4203、有效等位基因数1.4823±0.3888、Nei’s基因多样性0.2746±0.1975、Shannon’s信息指数0.4072±0.2721。64份种质的遗传相似性系数范围是0.5714~0.9379,平均遗传相似性系数为0.7793。聚类分析将64份种质分为5个类群,主坐标分析也将其分为5个类群。由结果可知,该地区橄榄种质总体遗传多样性水平较低,同时分子聚类分析结果与供试材料来源地无关。     

利用正交试验建立橄榄的ISSR-PCR反应体系

采用正交试验设计,对影响橄榄ISSR-PCR的5个主要因素(Mg2+浓度、dNTP、Taq DNA聚合酶、模板DNA浓度和引物浓度)在4个水平上进行优化筛选,建立了适合橄榄ISSR-PCR反应的最佳体系。即20μl体系中含有Mg2+3.0 mmol/L、dNTP 0.225 mmol/L、Taq DNA聚合酶1 U、模板DNA80 ng和引物0.25μmol/L,利用该体系对多个橄榄品种进行ISSR分析取得良好结果。     

ITS序列在橄榄地方品种资源鉴定中的应用

为了探讨更精确有效地鉴定橄榄品种资源及其遗传多样性的分子技术，利用测序方法测定了橄榄品种(系)的核糖体DNA中的内转录间隔区(ITS)序列(包括ITS1,5.8S和ITS2)。结果表明，橄榄ITS区序列总长度为629-634bp，长度变异仅为5bp，其中ITS1区为232-237bp，ITS2区为234-239bp，5.8SrDNA均为165bp，且高度保守无变异位点。橄榄品种(系)间ITS序列变异位点较少，仅有17变异位点占总碱基数的5.93%，简约信息位点7个占总碱基数1.51%，单一信息位点10个占总碱基数的2.16%，并且ITS1序列较ITS2序列变异丰富。因此，利用ITS序列中变异位点可以作为特异DNA指纹鉴定位点，为部分品种(系)的鉴定依据，但是仅仅利用ITS序列还难以鉴定区别所有的橄榄品种资源。     

潮汕橄榄地方品种(系)遗传多样性的ISSR 分析

为了分析潮汕地区橄榄地方品种(系)的遗传多样性,利用ISSR分子标记对该地区的54份橄榄地方品种(系)进行研究。结果表明,4个ISSR引物在供试品种(系)中共扩增得到49个谱带,其中多态性条带占79.59%;供试品种(系)的观察等位基因数、有效等位基因数、Nei''s遗传多样性指数和Shannon''s信息指数分别为1.7959、1.4316、0.2631和0.4008;供试品种(系)间的遗传相似性系数介于0.5763~0.9855,平均遗传相似性系数为0.7780。聚类结果表明,54份材料形成3个簇,品种(系)间的亲缘关系与来源地以及品种名关系不大。