石蝉草总木脂素含量测定方法建立及提取工艺优选

[目的]建立石蝉草总木脂素含量测定的方法并通过正交试验优选石蝉草总木脂素的最佳提取工艺。[方法]以五味子乙素为对照品绘制标准曲线,采用变色酸-硫酸显色体系,紫外-可见分光光度法测定石蝉草乙醇提取物中总木脂素含量;采用L₉(3⁴)正交试验法,以总木脂素含量为考察指标,优选石蝉草总木脂素的提取工艺。[结果]五味子乙素在4.00～24.00μg/mL线性关系良好(R²=0.996 1),平均回收率为97.68%,RSD为1.11%,石蝉草总木脂素优化的提取工艺为8倍量80%乙醇回流提取3次,每次2 h。[结论]该含量测定方法准确、简便、经济,适用于石蝉草总木脂素的含量测定,优选得到的提取工艺可为石蝉草总木脂素的提取提供参考。     

绞股蓝皂苷生物合成后修饰酶基因的cDNA克隆和组织表达特征

从绞股蓝转录组挖掘可能与绞股蓝皂苷生物合成相关修饰酶基因细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)及UDP-糖基转移酶(UDP-dependent glycosyltransferase,UGT)基因的cDNA进行克隆并开展了以下研究。根据课题组前期绞股蓝转录组数据,筛选CYP及UGT Unigenes,利用RT-PCR克隆ORF全长,并结合生物信息学对其编码蛋白进行功能分析,最后通过荧光定量PCR验证其在根、茎、叶的差异性表达。结果克隆得到两个ORF序列,分别命名为CYP94A1和UGT91A1;CYP94A1序列包含1509 bp的开放阅读框架,编码一条含503个氨基酸残基的肽链,具有CYP保守结构域;UGT91A1序列包含1383 bp的开放阅读框架,编码一条含461个氨基酸残基的肽链,具有UGT保守结构域。这两个基因的转录表达均具有组织特异性,在叶或茎中的表达均高于根。CYP94A1和UGT91A1的克隆、转录表达及生物信息学分析为进一步挖掘绞股蓝中CYPs、UGTs及功能验证提供了帮助,增加对CYP和UGT两个超基因家族的认识。