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[目的]转基因大豆事件L8014是本研究前期利用农杆菌介导的大豆子叶节高效遗传转化技术体系,将来源于山菠菜的基因BADH导入大豆(Glycine max)‘Williams 82’而获得具有良好耐盐(1.5%NaCl)性状的转基因大豆(该材料已经完成环境释放试验)。T-DNA插入位点侧翼序列的获得与分析对于转基因事件的安全评价及应用非常重要,本文旨在明确该转基因大豆材料的分子特征及其检测方法,以进一步推进安全评价。[方法]利用Southern杂交检测转基因大豆外源基因的拷贝数;基于基因组重测序技术,采用BWA(Burrows-Wheeler-Alignment)方法将重测序数据与T-DNA序列以及大豆基因组序列进行比对分析。[结果]T-DNA在大豆基因组10号染色体上的基因组区间3925017—3926022位点,插入方式为反向插入;结合PCR扩增技术获得外源T-DNA整合位点的左、右边界侧翼序列,基于该序列建立了转BADH基因大豆事件L8014的特异性PCR检测方法。[结论]本研究获得了转基因事件的整合位点及侧翼序列,方法快速、结果可靠,为转基因大豆及其衍生产品的检测提供了技术支撑。 相似文献
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防腐剂、保存温度、保存时间均可影响牛奶成分测定的准确性,本试验旨在研究不同保存条件对牛奶成分测定的影响。试验样品为5头荷斯坦牛的牛奶,试验设计对照(CON)、0.60g/L的重铬酸钾(potassium dichromate,PD)、1.00g/L的苯甲酸钠(sodium benzoate,SB)和1.00g/L的山梨酸钾(potassium sorbate,PS)四个处理组,每个处理设置-20℃、4℃、25℃和40℃四种保存温度,测定不同防腐剂和温度条件下,5头牛的奶样在18d保存期内乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、非脂固形物含量和尿素氮浓度的变化规律,以期得出最佳保存条件。结果表明:添加PD和SB不影响牛奶成分的测定结果,PS会导致乳蛋白率和非脂固形物检测结果显著升高(P<0.05);PD可在10d内保持牛奶成分的稳定,其防腐效果优于SB和PS;4℃下奶样的保存效果优于-20℃,25℃和40℃下奶样不能较长时间保存。 相似文献
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为探究不同免疫剂量的小剂量动物疫苗对免疫效果的影响,该试验选用180只3月龄绵羊,随机分为5组,每组36只,试验Ⅰ-Ⅴ组试验羊免疫剂量分别为正常剂量的1、2、3、4和5倍,在相同饲养条件下按照正常免疫程序进行基础免疫后,分别用1、2、3、4和5倍量的剂量接种口蹄疫疫苗,并定期测定各组试验羊的血清抗体效价和合格率。结果表明,使用不同剂量口蹄疫疫苗对试验羊进行免疫后,试验Ⅳ和Ⅴ组中血清中抗体效价显著高于前三组(P<0.05),且试验Ⅴ组中免疫后14d时达到最高值5.22,试验羊免疫抗体合格率在第7天升至最高,其中试验Ⅴ组达97.22%,比同一时间段试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别高了83.34%、77.78%、55.56%和8.34%。因此,4或5倍量的口蹄疫疫苗接种拟为推荐接种剂量,而且延长了疫苗的有效保护期。 相似文献
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为了研究人类动脉粥样硬化性疾病及其发病机制,采用高脂饲料饲喂合并球囊拉伤的方法,模拟人类自然发病过程,建立小型猪颈总动脉粥样硬化动物模型。实验结果显示:饲喂高脂饲料后第30天造模,动物存活率100%,随时间的增加体重逐渐升高;与基础值相比,血液中甘油三酯(TG)含量变化不显著,总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量变化显著(P!0.05);饲喂高脂饲料后第120天,与基础值相比,总胆固醇含量升至其5.6倍,低密度脂蛋白含量升至其8.4倍,高密度脂蛋白含量升至其4.4倍;动脉粥样硬化指数(AI值)均大于4;病理学观察显示血管损伤部位管腔狭窄,病变符合动脉粥样硬化的基本特征。上述结果表明,在本实验条件下,可以在4个月内成功复制小型猪动脉粥样硬化(As)模型,与其他现有的As动物模型相比,具有成模时间短,方法简便易行的特点。 相似文献
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[目的]构建犬黑皮质素受体4(MC4R)突变体D90N真核表达载体,并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板,应用重叠PCR扩增MC4R突变体D90N目的基因,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N经酶切和测序鉴定;采用FuGENEHD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72.0h,提取细胞内总RNA,用RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,用WesternBlot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N重组真核表达载体,测序结果显示含有D90N突变位点。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D90N,重组体能在MD-CK细胞中表达。 相似文献
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小动物(尤其犬和猫)角膜损伤在兽医临床上十分常见。角膜损伤治疗不当或愈合延迟会导致视力障碍,甚至失明。研究表明,在角膜损伤的修复中细胞生长因子有成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、转化生长因子-β、角质细胞生长因子、血小板衍生生长因子和神经生长因子等,起着重要的调节作用。这些细胞生长因子通过自分泌或旁分泌作用于角膜组织细胞相应受体,并经多种信号转导通路影响其下游产物的表达,调控角膜细胞的增殖、迁移、分化和凋亡。细胞生长因子及其受体在角膜组织各层的分布、数量和作用的时序性差异决定着损伤角膜的有效修复。体内及体外研究显示,细胞生长因子将在小动物临床上有广阔的应用前景。 相似文献
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从近年来日益严重的农产品销售困难现象出发,根据农产品的销售现状分析了其销售困难的原因,提出其对策,以期促进农产品流通和销售。 相似文献