改进TRIzol法提取不同发育时期海葵的总RNA

获得海葵纯度高、完整性好的高质量RNA,为海葵高通量转录组测序等分子生物学的深入研究提供基础,以南海海葵为研究对象,采用改进TRIzol法提取不同发育时期海葵的总RNA,并利用琼脂糖凝胶电泳、Nano Drop TM 2000分光光度计和Agilent 2100生物分析仪检测其质量。结果表明:改进TRIzol法从不同发育时期的海葵中提取的RNA电泳条带清晰、海葵-大与海葵-中的RNA完整性好,海葵-小RNA完整性不合格;海葵-大、海葵-中和海葵-小的纯度(OD260/280)分别为1.981、1.983和2.071,浓度分别为335ng/μL、357ng/μL和232ng/μL。改进TRIzol法可有效从海葵中提取高质量RNA。     

套膜海葵总蛋白的提取和酶解条件优化及其杀虫活性

【目的】明确套膜海葵总蛋白的提取工艺、最优酶解条件及其杀虫活性,为拓展和开发海葵酶解多肽的应用提供理论依据。【方法】采用裂解液法提取海葵总蛋白,结合单因素试验对其酶解条件进行优化;同时采用昆虫注射法研究酶解海葵多肽的杀虫活性。【结果】从套膜海葵中提取海葵总蛋白的分子量主要为31.0～43.0kDa,20g套膜海葵可提取海葵总蛋白160mg,蛋白浓度为0.5mg/mL;海葵总蛋白的最优酶解条件为pH 8、碱性蛋白酶(最佳水解酶)4 000U/g、温度60℃、酶解6h,在此条件下酶解得率为9.145%;昆虫注射海葵酶解多肽1.0μg/mg时死亡率达90%。【结论】获得海葵总蛋白酶解的最佳蛋白酶及其最优酶解条件,成功制备具有杀虫活性的海葵酶解多肽,为深入开发海葵酶解多肽的杀虫活性奠定了基础。     

基于SRAP技术的姜科植物遗传多样性分析

为姜科植物资源的保护与利用提供科学依据,以采自海南岛内的11种姜科样品为材料,采用相关序列扩增多态性(Sequence-related amplified polymorphism,SRAP)分子标记技术对基因组进行提取与扩增,并分析其遗传多样性。结果表明:姜科植物提取的DNA条带明显清晰、未见降解、质量良好;SRAPPCR扩增共获得条带59条,均为多态性条带,多态性比率均为100%;姜科植物的遗传相似系数在0.500 0～0.838 4,其中草豆蔻与大苞闭鞘姜、海南砂仁与皱叶山姜、红豆蔻与光叶山姜、阳春砂与阳荷两两间遗传相似系数最大,均为0.838 4,表明其亲缘关系最近;在遗传相似系数0.500 0处,11种姜科药用植物分为两大类,Ⅰ类包括益智、草豆蔻、大苞闭鞘姜、海南砂仁和皱叶山姜,Ⅱ类包括红豆蔻、光叶山姜、高良姜、阳春砂、阳荷和爪哇白豆蔻。     

海南益智野生居群表型多样性分析

[目的]分析益智野生居群间的遗传变异。[方法]统计海南野生益智居群的平均株高、单丛茎杆数、单丛果穗数、单穗重等影响产量的形态表型数据并计算其变异系数。[结果]居群间性状差异显著,变异系数差异较大,具有较丰富的遗传多样性。[结论]可以从海南野生益智群体中筛选出一些优良性状以供益智栽培种的品种改良。     

基于ITS序列研究南药益智遗传多样性

海南岛益智及其姜科资源丰富,本研究基于ITS序列分析技术来研究海南岛不同居群益智及其姜科资源的遗传多样性。在海南岛内采集23份样品,其中益智样品18份,其他姜科植物样品5份,并从GenBank中获取3份山姜属植物的ITS序列作为研究系统的外群。通过软件Mega5.1比较分析了益智及其姜科植物的遗传距离和ITS序列的变异位点和信息位点,构建了NJ系统树等分析了益智种内与其姜科植物种群间的遗传多样性。研究结果表明海南岛不同居群的益智种内ITS序列无差异,未发现遗传变异位点,而姜科植物种间差异显著,表明其遗传多样性丰富。本研究为南药益智的种质资源的保护和可持续利用奠定理论基础。