鹅α干扰素基因在COS-7细胞中的瞬时表达及抗病毒功能初探

为了研究鹅α干扰素( goIFN-α)基因的特性和功能,将天府肉鹅的α干扰素基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建重组质粒pcDNA3.1-goIFN-α,脂质体介导将其转入COS-7细胞中;应用间接免疫荧光、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫印迹(Western-blot)法检测goIFN-α基因在COS-7细胞中的转录和表达情况,并对COS-7细胞表达上清液进行抗病毒活性检测.结果表明:目的蛋白在转染12 h后就可以被检测出,36 h前目的蛋白在上清液中快速增加,之后增加速度变慢;重组质粒能够在COS-7细胞内得到高效表达,表达的蛋白分子质量为38ku,比预测的分子质量(约21 ku)大;间接免疫荧光显示,细胞内出现黄绿色荧光,胞核附近最亮;表达产物经细胞病变抑制法测定,显示出具有明显的抗猪水泡性口炎病毒(VSV)及小鹅瘟病毒(GPV)的活性.     

兔抗鹅IgG酶标抗体的制备及初步应用

为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅 IgG抗血清效价约 1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。