POR基因敲除、回补及过表达LO2细胞株的构建及作为AFB1染毒模型的初步应用

为了构建POR基因稳定敲除(POR^KO)、回补(POR^CO)、过表达(POR^OE)的LO2细胞株,以便为后续深入开展POR基因在AFB₁致毒性机理中的功能研究提供细胞模型。本研究首先利用CRISPR/Cas9技术设计2条靶向POR基因的sgRNA并克隆至lentiCRISPR v2载体,进行慢病毒包装与感染,筛选出LO2 POR^KO单克隆细胞后进行测序及Western blot鉴定。其次用同源重组方法构建pcDNA3.1(+)/myc-His B-POR重组质粒,经对POR^KO细胞和野生型细胞转染分别构建LO2 POR^CO及LO2 POR^OE细胞株,以G-418筛选后进行Western blotting鉴定。再用4μmol·L^-1及8μmol·L^-1 AFB₁分别对野生型、LO2 POR^KO、LO2 POR^CO