两株海洋滩涂淤泥芽孢杆菌的筛选鉴定及药敏试验

[目的]筛选出具有高效产酶活性和一定耐药性的芽孢杆菌,为开发本土高效的水产养殖益生菌提供参考依据.[方法]从广东湛江市海滨公园红树林采集淤泥样品,通过菌株富集和功能筛选,采用形态特征和生理生化特征、16S rDNA序列及gyrB基因克隆等方法对分离菌株进行鉴定,并开展几种常用渔药(复方新诺明、甲氧苄胺嘧啶、氨苄西林和四环素)的药敏试验.[结果]从广东湛江市海滨公园红树林淤泥中分离获得两株生长速度快且功能较强的菌株,分别命名为YB-3和YB-5.菌株YB-3的氨氮降解和淀粉水解能力较强,可在7%NaCl、9%NaCl、4℃、50℃、pH 5.7、pH 9.5的条件下生长,其16S rDNA序列长度1459 bp、gyrB基因长度1178 bp,综合形态学、生理生化及系统发育进化树分析,确定菌株YB-3为弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus).菌株YB-5的酪蛋白降解能力较强,可在7%NaCl、4℃、50℃、60℃、pH 5.7、pH 9.5的条件下生长,其16S rDNA序列长度1461 bp、gyrB基因长度1181 bp,综合形态学、生理生化及系统发育进化树分析,确定菌株YB-5为蜡样芽孢杆菌(B.cereus).药敏试验结果显示,菌株YB-3对四环素、氨苄西林和利福平敏感,对甲氧苄胺嘧啶和复方新诺明不敏感(耐药);菌株YB-5对四环素敏感,对氨苄西林、甲氧苄胺嘧啶、复方新诺明和利福平不敏感(耐药).[结论]从广东湛江市海滨公园红树林淤泥中分离获得两株芽孢杆菌,其中一株为弯曲芽孢杆菌,具有较强的氨氮降解和淀粉水解能力;另一株为蜡样芽孢杆菌,具有较强的酪蛋白降解能力.两株芽孢杆菌均具有一定的耐低温、高温特性和耐盐、耐酸碱等特性,且具有耐复方新诺明和甲氧苄胺嘧啶特性,可进一步发掘其在饲料加工、促营养物质吸收利用及降解腐殖质、缓解环境污染等方面的应用价值,或与其他具有益生功能的菌株制成复合型菌剂.     

半滑舌鳎GAPDH基因开放读码框的克隆及序列分析

甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)广泛存在于真核生物中,对许多生理活动具有重要作用.参考金头鲷和斑马鱼的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计一对简并引物,提取半滑舌鳎肌肉组织总RNA,采用RT-PCR技术对GAPDH基因进行克隆测序及序列分析.结果表明,从半滑舌鳎肌肉组织中成功克隆了GAPDH基因的开放读码框(ORF),序列全长1002 bp,编码333个氨基酸,分子量为36.0235 ku,等电点PI为7.75.序列同源性分析显示,该序列与其他鱼类的GAPDH氨基酸序列具有较高的同源性.     

一株耐药型红树林乳酸菌的筛选鉴定及培养基优化

抗生素滥用严重阻碍了水产养殖业的绿色发展,海洋源性耐药型乳酸菌的开发利用是水产养殖业可持续发展的重要举措之一。本研究从广东省湛江市渔港公园红树林淤泥中分离筛选出一株乳酸菌（命名LPAR1）并进行菌种鉴定,继而探究其耐药性和发酵工艺参数。经微生物形态学、生理生化和分子鉴定分析,确定菌株LPAR1为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）。药敏试验显示,乳酸片球菌LPAR1对复方新诺明、四环素和甲氧苄胺嘧啶耐药,对氨苄西林和利福平敏感。采用单因素试验研究了影响乳酸片球菌LPAR1生长的培养基条件,并确定其最佳碳源为乳糖,最佳氮源为蛋白胨,最佳pH为6.00。经响应面试验优化,最佳发酵培养基条件为乳糖25.00 g/L,蛋白胨20.77 g/L,pH 6.5。在该条件下,菌落数为9.105×8log CFU/mL,该值与模型预测值（9.098×8log CFU/mL）接近。研究结果可为红树林海洋乳酸片球菌的开发利用、本地化水产养殖微生态制剂的研发提供基础依据。 [关键词] 红树林|乳酸片球菌|鉴定|耐药性|培养基优化     

红鳍东方鲀组织蛋白酶L基因的电子克隆及序列分析

[目的]采用电子克隆技术克隆红鳍东方鲀组织蛋白酶L基因,并应用生物信息学技术分析其推导氨基酸的序列特征,为进一步探索其在免疫功能中的作用奠定基础.[方法]以斑马鱼的组织蛋白酶L核苷酸序列(Y08321.1)为探针,对红鳍东方鲀基因组数据库进行BLASTn分析,将检索到的匹配结果进行碱基3′端及5′端的适当延长,用DNAssist预测其编码信息;然后从GenBank获取若干物种组织蛋白酶L序列,用DNASTAR软件进行比对.[结果]红鳍东方鲀组织蛋白酶L基因全长2005 bp,含7个外显子和6个内含子;包含编码336个氨基酸的开放阅读框(1011 bp);其推导的氨基酸序列具有组织蛋白酶L所特有的氨基酸保守结构域(ERWNIN和GNFD)及由Cys25、His159和Ash175残基组成的保守活性位点,与青鳉、鲤鱼的组织蛋白酶L基因具有较高的序列一致性.[结论]红鳍东方鲀组织蛋白酶L的一些结构域和催化活性位点在进化过程中比较保守,与鱼类物种来源的组织蛋白酶L在氨基酸水平上一致性较高,在进化上亲缘关系较近.     

响应面法对苦槠果实中黄酮提取工艺的优化

为研究苦槠(Castanopcis sclerophylla)果实中黄酮的提取工艺,利用单因素试验及响应面分析法,探讨了乙醇体积分数、料液比、提取温度和提取时间对苦槠果实黄酮提取量的影响。结合响应面交互作用,分析优化得出苦槠果实中黄酮的最佳提取条件为:乙醇体积分数50%,料液比1∶36(g∶m L),提取时间2.5 h,提取温度83℃。在此条件下黄酮提取量实测值可达2.107 mg/g,与预测值(2.091 mg/g)相吻合。     

海水养殖斜带石斑鱼致病性鳗弧菌的分离鉴定及药敏试验

[目的]了解海水养殖斜带石斑鱼弧菌病的病原,为生产中有效防治石斑鱼弧菌病提供科学依据.[方法]采用常规方法进行患病斜带石斑鱼病原菌分离,人工感染试验确定其致病性,以形态学观察、生理生化测试结合16SrRNA和gyrB基因序列分析等方法进行菌株鉴定,并以K-B纸片扩散法进行药敏试验.[结果]从广东省湛江市某养殖场患病斜带石斑鱼中分离获得l株优势菌株(M1),经人工感染试验证实其对斜带石斑鱼具有较强的致病性.M1菌株的16S rRNA序列和gyrB基因序列与GenBank数据库中的鳗弧菌具有较高相似性,其同源性均在95.7%以上.根据M1菌株的形态特征、生理生化特性及分子特征,可鉴定其属于弧菌属的鳗弧菌(Vibrio anguillarum).药敏试验结果显示,M1菌株对庆大霉素、新生霉素、阿奇霉素、氟苯尼考、利福平、诺氟沙星和左氟沙星等7种药物高度敏感,对阿洛西林、强力霉素、链霉素、复方新诺明和甲氧苄啶等14种药物敏感.[结论]引起广东省湛江市某养殖场海水养殖患病斜带石斑鱼弧菌病的病原菌为弧菌属鳗弧菌,生产中可适度选用氟苯尼考、强力霉素、复方新诺明和甲氧苄啶等抗菌药物进行防治.     

湛江东海岛鲍鱼养殖场水质分析

为了监测湛江东海岛鲍鱼养殖场的水质状况,2011年春季对湛江东海岛九孔鲍养殖场的水质进行采样分析,并应用单项指标评价和富营养化评价等方法,对水质状况进行了评价。结果表明,该养殖场水体采样点的水温为16.0～17.5℃,盐度是22,pH值在7.83～7.90之间,均符合我国第二类海水水质标准。各采样点的溶解氧(DO)和生化需氧量(BOD5)也符合第二类海水水质标准,但化学需氧量(COD)值在14.88～15.36 mg/L之间,与第二类海水水质标准相比严重超标;各采样点的无机氮(DIN)均以NO 3--N为主,DIN值在1.053～1.569 mg/L之间,DIN含量严重超过我国第二类海水水质标准。该养殖场水体属于氮富营养化。