小菜蛾表皮蛋白基因克隆及表达分析

[目的]克隆小菜蛾表皮蛋白基因(Plutella xylostella cuticular protein,PxyICP),分析其序列特征和发育表达模式,为深入研究PxyICP在小菜蛾表皮形成中的生理功能提供科学参考.[方法]以小菜蛾为试验材料,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和快速扩增cDNA末端(RACE)技术克隆PxyICP,以生物信息学方法对其序列特征进行分析,并采用实时荧光定量PCR研究PxyICP mRNA在小菜蛾不同发育时期中的相对表达量.[结果]克隆获得的PxyICP基因开放阅读框长531 bp,编码177个氨基酸,相对分子质量约18.90 kD,等电点为5.32.氨基酸序列分析结果表明,小菜蛾表皮蛋白第1~16位氨基酸是参与跨膜蛋白转移的信号肽,且该序列具有昆虫表皮蛋白CPR家族中RR-1型保守基序的典型特征.不同发育时期的实时荧光定量PCR分析结果表明,PxyICP在小菜蛾各发育时期的表达量不同,其中PxyICP在2、3和4龄幼虫、蛹和成虫中的表达量分别是1龄幼虫的2.43、0.51、0.63、3.19和12.32倍,以在成虫的表达量最高.[结论]成功克隆获得PxyICP基因,根据其发育表达模式推测PxyICP蛋白参与小菜蛾成虫表皮的硬化和黑化等生理过程.     

西柚对桔小实蝇的引诱作用及挥发性成分GC-MS分析

采用Y型嗅觉仪测定了西柚对桔小实蝇(Bactrocera dorsalis)雌虫的引诱活性。同时采用固相微萃取技术（Solid Phase Microextraction,SPME）对西柚挥发性物质进行收集，并运用气相色谱－质谱联用技术（GC-MS）对西柚挥发物化学成分进行了分析。结果表明，西柚对桔小实蝇雌虫具有明显的引诱作用。西柚挥发物主要成分为烯类物质，其中含量大于5%的物质为柠檬烯（45.52%）、月桂烯（4.09%）、α-蒎烯（1.28%）、反式石竹烯（0.64%）和萜品油烯（0.61%）等5种烯类物质。推测这些物质可能是西柚引诱桔小实蝇雌虫的主要活性成分。     

2种不同成熟度杨桃对橘小实蝇的产卵影响及挥发物成分比较分析

【目的】探讨2种不同成熟度杨桃(黄熟杨桃和绿熟杨桃)对橘小实蝇雌虫产卵量的影响并分析2者挥发物成分的差异。【方法】采用产卵杯法比较分析黄熟杨桃和绿熟杨桃对橘小实蝇雌虫产卵量的差异,同时采用固相微萃取技术(solid phase microextraction,SPME)和气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对2者的挥发性化学成分进行种类和含量的比较分析。【结果】黄熟杨桃对橘小实蝇雌虫的产卵量均显著高于绿熟杨桃。2种不同成熟度杨桃的挥发性物质在种类和含量上存在明显差异,黄熟杨桃中共检测出30种气味挥发性物质,而绿熟杨桃中共检测出24种气味物质,且有多种化合物在黄熟杨桃中存在而在绿熟杨桃中未检测出。除此之外,黄熟杨桃中的一些物质,如己酸甲酯、乙酸-反-2-己烯酯、庚酸甲酯、罗勒烯异构体混合物、辛酸甲酯、β-紫罗酮和4,6(Z),8(Z)-大柱三烯这7种物质的含量均明显高于绿熟杨桃。【结论】己酸甲酯、乙酸-反-2-己烯酯、庚酸甲酯、罗勒烯异构体混合物、辛酸甲酯、4,6(Z),8(Z)-大柱三烯、β-紫罗酮这7种物质可能是黄熟杨桃引诱橘小实蝇产卵的活性物质。     

斜纹夜蛾普通气味结合蛋白基因SlitGOBP2的时空表达分析

[目的]分析斜纹夜蛾普通气味结合蛋白(GOBP)基因(SlitGOBP2)的时空表达模式,为深入研究Slit-GOBP2蛋白在斜纹夜蛾生长发育过程中的生理功能提供参考.[方法]以斜纹夜蛾为试验材料,分别收集并提取斜纹夜蛾卵、1~6龄幼虫、蛹共8个不同发育时期和雌、雄成虫触角、喙、胸、前足、中足、后足、腹部、翅膀共16个不同组织的RNA;以斜纹夜蛾Actin为内参基因,采用半定量RT-PCR分别对SlitGOBP2基因在雌、雄虫不同组织及不同发育阶段的基因表达模式进行比较分析.[结果]SlitGOBP2基因在斜纹夜蛾雌、雄虫的触角、喙、胸、前足、中足、后足、腹部和翅膀各组织中均有表达,其中在雌、雄虫触角中的表达水平均最高,在雌虫的喙、前足、后足和翅膀次之且明显高于雄虫的相应部位;雌、雄虫胸部和腹部的表达水平基本相同;而雌虫在中足的表达水平略低于雄虫.SlitGOBP2基因在斜纹夜蛾1~4龄幼虫和蛹后期均有表达,且在1龄幼虫和蛹后期中表达量相对较高,而在卵期、5和6龄幼虫中不表达.[结论]SlitGOBP2蛋白除具有取食、寻找寄主和产卵场所等基本功能外,雌虫可能还具有感受其他特殊信息素的功能.     

不同性诱剂诱芯对广州地区斜纹夜蛾引诱效果比较试验

【目的】比较不同性诱剂诱芯对广州地区斜纹夜蛾的引诱效果。【方法】在广州地区田间进行 4 种不同厂家的斜纹夜蛾诱芯（NB、QZ、BJ、ZZ）诱捕效果的测定,作物、田间管理措施等其他外界因素基本 一致的情况下,每隔 1 周对诱集虫口数进行一次收集,每隔 4 周更换 1 次诱芯。对 4 种不同厂家的斜纹夜蛾诱 芯的诱捕虫口数进行差异显著性分析。【结果】试验期 NB、QZ、 BJ、ZZ 4 种诱芯每瓶诱蛾总数分别为 2 402、 786、394、123 头,诱芯 NB 是诱芯 QZ 的 3.05 倍、诱芯 BJ 的 6.09 倍、诱芯 ZZ 的 19.53 倍;平均每日每瓶诱蛾 数分别为 26.1、8.5、4.2、1.3 头,诱芯 NB 是诱芯 QZ 的 3.07 倍、诱芯 BJ 的 6.21 倍、诱芯 ZZ 的 20.08 倍。【结论】 诱芯活性：NB ＞ QZ ＞ BJ ＞ ZZ,半衰期时间：NB（32.25d）＞ QZ（25.1d）＞ BJ（16.04d）＞ ZZ（12.1765d）。