绵羊胚胎成纤维细胞饲养层用于培养人诱导性多能干细胞的效果研究

试验在体外分离培养1月龄绵羊胚胎成纤维细胞（sheep embryonic fibroblast，SEF），经丝裂霉素C处理后探讨其作为诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）体外培养饲养层的可行性。试验以SNL饲养层细胞为对照，人iPSC（hiPSC）为培养对象，通过形态学观察、碱性磷酸酶（AP）染色、以及实时荧光定量PCR和免疫细胞化学对hiPSC标志基因mRNA和蛋白表达的检测，比较了SEF细胞和SNL细胞作为干细胞饲养层的效果。结果表明，在试验期内，与SNL饲养层体外培养的hiPSC相似，SEF饲养层体外培养的hiPSC在形态上呈集落样生长，增殖速度快；AP染色呈蓝紫色，能够维持未分化状态；能正常表达多能性标志基因。两种饲养层细胞培养的hiPSC多能性标志基因c-Myc、Klf4、OCT4和SOX2 mRNA的表达以及OCT4、SOX2、SSEA4和TRA-1-60蛋白的表达并无显著差异（P>0.05）。本研究结果初步表明SEF可作为体外培养iPSC的饲养层细胞，为进一步建立可表达促生长因子的基因修饰SEF细胞系奠定了基础。     

郁南无核黄皮花果生长发育的生物学特性研究

对郁南无核黄皮花、果生长发育的生物学特性进行系统观察的结果表明:无核黄皮的花粉比有核黄皮的花粉略大,且大小不均匀,畸形率相对较高,花粉萌发率低,花粉管短;无核黄皮开花10天后进入盛花期,开花高峰期持续1周,累积开花曲线呈“S”形;果实发育历时3个月,其中有2次落果高峰,分别发生在谢花后7~10天和谢花后30~35天,谢花后的座果率低。指出在盛花期和谢花期使用保果剂可使无核黄皮的座果率明显提高。     

绵羊ATF3基因的生物信息学分析及其在营养剥夺应激下的表达变化

本研究旨在探究绵羊ATF3基因的蛋白特征、转录调控元件及其在营养剥夺应激下的表达变化。运用生物信息学相关软件对绵羊ATF3蛋白特征和ATF3基因启动子区元件进行分析预测,并在绵羊禁食3 d后检测骨骼肌中ATF3mRNA的表达量。结果显示,绵羊ATF3氨基酸数为187,分子式为C920H1521N273O282S12,等电点为8.89,不稳定系数是71.73,总平均疏水性值为-0.630;ATF3蛋白定位于细胞核,二级结构主要由α螺旋和无规则卷曲组成,三级结构与二级结构保持一致且可信度高;进化树显示绵羊ATF3与牛、山羊、猪的同源性较高;qRT-PCR结果显示,与正常组相比,禁食组绵羊骨骼肌中ATF3mRNA表达量极显著降低;绵羊ATF3基因启动子区存在CREB、NFKB、AP1和GRE等与应激有关的转录因子结合元件,暗示了ATF3表达量下调的原因可能与这些元件和相应转录因子的结合有关。     

绵羊c-Myc与EGFP融合蛋白的真核表达及其对细胞增殖的调控作用

为了探讨c-Myc基因对细胞增殖及相关基因表达的调控作用，本试验构建了c-Myc-（G₄S）₃-EGFP融合基因的真核表达载体pc-Myc-EGFP，并利用生物信息学分析了其结构和理化特征。转染后分别通过细胞计数和qRT-PCR检测了其对绵羊胚胎成纤维细胞（sheep embryonic fibroblasts，SEF）增殖及相关基因表达的影响，并利用启动子分析软件解析了相应的表达调控机制。酶切鉴定和测序结果表明，载体构建成功。生物信息学分析表明，绵羊c-Myc蛋白主要定位于细胞核，含有螺旋环螺旋（helix-loop-helix，HLH）结构域，其分子量为48 474.78 u。融合蛋白c-Myc-（G₄S）₃-EGFP有较强的亲水性，且含有31个磷酸化位点。因（G₄S）₃有较高的灵活度（9.848 5），两侧的c-Myc和EGFP都保持各自的空间构象且互不干扰。进一步的细胞试验结果表明，重组质粒pc-Myc-EGFP在SEF中能够表达。过表达c-Myc促进了SEF的增殖，使cyclin D2、Cdk4、Cdk6、cyclin E1、cyclin A2、cdc25A mRNA的表达水平分别升高至5.20、3.10、6.54、6.52、23.37和8.22倍（P<0.01），E2F1 mRNA的表达升高至1.83倍（P<0.05）。启动子分析结果表明，各基因的5'调控区存在c-Myc和E2F1的结合元件。综上所述，绵羊c-Myc通过上调细胞周期相关基因的表达促进SEF细胞增殖，c-Myc的作用机制可能是通过直接作用于靶基因5'调控区的E-box元件，也可能是通过其他转录因子（如E2F1）的间接调控作用而实现。     

黄莺花入侵性研究

黄莺花因色彩鲜艳,生产成本低,已成为广东花卉市场上的主要配花之一。但是由于其外形与入侵性杂草加 拿大一枝黄花非常相似,广遭质疑。本文从黄莺花花粉萌发、种子萌发、胚珠结构以及伴生的植物等方面,对黄莺 花的入侵性和破坏性进行研究。结果显示,黄莺花的子房结构不完整,花粉萌发率几乎为零,因此认为该植物不会 对伴生植物产生抑制和破坏作用,可以继续应用于鲜切花产业。      

绵羊HADHB基因生物信息学分析及营养应激状态下的表达变化

本研究旨在探索绵羊HADHB的分子特性以及在营养应激中的作用。根据GenBank登录的基因序列(XM_004005732.3)对HADHB基因进行一系列生物信息学分析。随机选取6只成年健康绵羊,分为正常组和禁食组。通过荧光定量PCR技术及NormFinder软件检测2个常用内参基因ACTB和GAPDH的稳定性,然后测定HADHB基因的表达。结果表明:绵羊HADHB分子式为C₂₂₇₃H₃₆₄₈N₆₃₀O₆₇₃S₂₄,由475个氨基酸组成,存在蛋白质跨膜区,该蛋白有91.3%位于线粒体;HADHB理论等电点(pI)为9.38,平均疏水性为-0.093,不稳定指数为34.16;HADHB基因在不同物种中保守性较高,进化树和三级结构预测结果均表明绵羊和山羊、藏羚羊、牛亲缘关系较近;荧光定量结果表明,ACTB更适合作为本实验的内参基因,禁食组绵羊HADHB基因mRNA表达量较正常组显著上升。本研究成功构建了营养缺陷应激模型,为绵羊HADHB及相关通路的进一步探索奠定了基础。