干扰ELOVL6基因对奶牛乳腺上皮细胞脂代谢相关基因的表达及甘油三酯合成的影响

为揭示超长链脂肪酸延伸酶6（ELOVL6）对奶牛乳腺上皮细胞脂代谢及甘油三酯含量的影响，试验采用PCR技术扩增得到ELOVL6基因CDS区，利用在线软件对蛋白的疏水性和跨膜区进行预测，合成并筛选靶向ELOVL6基因的有效siRNA，将有效siRNA转染乳腺上皮细胞，qRT-PCR检测干扰ELOVL6基因对奶牛乳腺上皮细胞乳脂代谢相关基因表达的影响，利用试剂盒检测细胞内甘油三酯含量。结果表明：（1）克隆得到全长为795 bp的奶牛ELOVL6基因（GenBank 登录号：MW960011）的CDS区|经序列比对发现，奶牛的ELOVL6基因序列与牛（NM_001102155.1）、山羊（NM_001314257.1）、大羚羊（XM_040237469.1）的同源性分别为100%、96.73%、96.35%|ELOVL6蛋白的理论等电点为5.94，疏水最大值为2.467，最小值为-2.411，具有6个跨膜区域。（2）成功筛选到靶向ELOVL6基因的siRNA,干扰效率达到90%以上（P ＜ 0.05）。（3）将筛选出的siRNA转染至奶牛乳腺上皮细胞，通过qRT-PCR技术检测乳脂合成相关基因的表达，与对照组相比，干扰ELOVL6基因显著抑制了脂肪酸从头合成及去饱和相关基因乙酰辅酶A羧化酶A（ACACA）、固醇调节元件结合蛋白1（SREBF1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARG）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）、脂肪酸转运相关基因脂肪酸结合蛋白（FABP3）、甘油三酯合成相关基因二酰甘油酰基转移酶（DGAT1）、磷酸甘油酰基转移酶6（AGPAT6）和甘油三酯水解相关基因激素敏感性脂肪酶（HSL）的表达量（P ＜ 0.05）。（4）干扰ELOVL6基因后，乳腺细胞内的甘油三酯含量显著降低（P ＜ 0.05）。上述表明，ELOVL6基因在奶牛乳腺上皮细胞中通过影响脂质代谢相关基因的表达及甘油三酯含量，进而对奶牛乳腺的脂代谢产生调控作用。 [关键词] 超长链脂肪酸延伸酶6|小干扰RNA|乳腺上皮细胞|脂代谢     

氨氮浓度对附植藻类在菹草上定植及演替的影响

为了更好地认识附植藻类群落在水体富营养化过程中的定植及群落演替规律,利用显微计数法,通过室内静态模拟实验,研究了水体不同氨氮水平对太湖常见沉水植物菹草上附植藻类的影响。结果表明:附植藻类在不同氨氮浓度下建群速度和时间是不同的,并且不同的氨氮浓度会改变附植藻类的群落结构,最终演变成低浓度下以硅藻门为绝对优势种,高浓度下以绿藻门为优势种的局势;某些附植藻类只在特定的氨氮环境下表现出优势,如绿藻门的新月藻只在1.5 mg·L-1的低浓度组和5 mg·L-1的高浓度组才表现出优势,而硅藻门的针杆藻只在2.5 mg·L-1的中浓度组表现出优势;低浓度范围内营养盐的增加会促进附植藻类生物量的积累,但过高则会抑制生物量;中等浓度的氨氮营养盐中附植藻类的生物量最大,此时的种类也最多。该研究表明氨氮营养盐对附植藻类的群落演替影响显著,附植藻类或许是沉水植物衰退的一个重要因素。     

MiR-206在奶牛乳脂代谢中的作用及.研究进展

牛奶是国民饮食的重要营养物质来源,其丰富的脂肪酸种类及多不饱和脂肪酸含量显现出了较高的营养价值.miRNAs通过参与乳脂代谢影响脂肪酸和甘油三酯的生成.miR-206作为miRNAs中的一员,属于短链非编码RNA,长度仅有21～25bp,通过与下游关键靶基因3'UTR结合抑制其表达.本文综述了miR-206在奶牛乳脂代...     

bta-miR-29d-3p对奶牛乳腺上皮细胞乳脂代谢相关基因表达及甘油三酯含量的影响

为探索bta-miR-29d-3p与奶牛乳腺上皮细胞乳脂代谢相关基因表达及甘油三酯含量之间的调控关系，试验设计并合成bta-miR-29d-3p的模拟物和抑制物，通过瞬时转染技术将bta-miR-29d-3p的模拟物和抑制物转染到奶牛乳腺上皮细胞中，利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测bta-miR-29d-3p抑制或过表达后奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因表达水平的变化，细胞内甘油三酯含量用试剂盒检测。结果显示：bta-miR-29d-3p过表达后甘油三酯合成相关基因二酰甘油酰基转移酶（DGAT1）、线粒体甘油-3-磷酸酰基转移酶（GPAM），脂肪酸合成相关基因乙酰辅酶A羧化酶A(ACACA)、脂肪酸合成酶（FASN），转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBF1)的表达量显著降低（P <0.01），肝X受体Α（LXRA）表达量显著上升（P <0.01）。同时过表达bta-miR-29d-3p奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯含量显著降低（P <0.05）。干扰bta-miR-29d-3p显著增加了DGAT1、ACACA、FASN、GPAM、转录因子过氧化物酶体...     

奶山羊心脏型脂肪酸结合蛋白（FABP3）基因启动子的克隆及活性分析

心脏型脂肪酸结合蛋白（FABP3）是一种15 kDa的蛋白，涉及信号转导途径，参与长链脂肪酸的摄取及利用。本研究采用PCR技术扩增FABP3启动子序列，通过缺失分析构建了5个不同缺失片段荧光素酶报告基因载体，并转染奶山羊乳腺上皮细胞，通过双荧光素酶报告基因系统检测FABP3缺失片段启动子活性。结果表明：从奶山羊基因组中克隆得到2109 bp FABP3基因启动子序列（包括转录起始位点上游1985 bp），与牛（KJ649748.1）、猪（HM591296.1）和人（NG047049.1）的基因组序列同源性分别为90%、80%、75.08%。经转录因子在线软件预测分析发现，该启动子含有潜在的TATA框（TATA-box）、过氧化物酶增殖物激活受体反应元件（PPRE）、肝X受体反应元件（LXRE）、雌激素受体（ER）及两个环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）的结合位点，分别位于-1632 bp和-189 bp。缺失突变研究发现，启动子片段-1801 ～ +124活性最高，同时这一片段含有两个CREB结合位点，而当缺失至-80位点时，活性显著下降（P ＜ 0.05），且这一片段不包含CREB结合位点。表明CREB可能参与调控FABP3基因启动子的活性，为FABP3基因的转录调控研究提供理论依据。 [关键词] 心脏型脂肪酸结合蛋白（FABP3）|启动子|基因克隆|西农萨能奶山羊