FRBI对CA125、EGF、E2和IP3分泌及ERβmRNA和蛋白表达的影响

为了探究促卵泡激素受体结合抑制剂(FRBI)是否影响卵母细胞中糖类抗原125(CA125)、表皮生长因子(EGF)、雌二醇(E_2)、三磷酸肌醇(IP3)和cAMP分泌,雌激素受体β(ERβ)mRNA和蛋白表达水平,并阐明FRBI作用的信号通路。以绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)作为研究对象,在培养基中分别添加10,20,30,40μg/mL的FRBI,分别检测培养液中CA125、EGF、E_2、IP3和cAMP的浓度,研究卵母细胞中ERβmRNA和蛋白表达水平。结果显示与对照组(CG)相比较,FRBI-3组和FRBI-4组CA125和IP3浓度降低。FRBI-1组CA125和FRBI-2组IP3浓度明显高于CG。E_2浓度随FRBI添加量增加(从10μg/mL到30μg/mL)而升高,FRBI-3组E_2浓度最高。FRBI-3组和FRBI-4组cAMP浓度明显低于CG和FSH组。FRBI组ERβmRNA和蛋白表达水平逐渐降低,FRBI-4组ERβ蛋白水平低于FSH(P0.05)。FRBI浓度与EGF和E_2呈正相关。结果表明,高剂量的FRBI能抑制绵羊卵母细胞中CA125、cAMP和IP3产生,增加E_2浓度,降低卵母细胞ERβ基因和蛋白表达水平,FRBI可能抑制IP3和cAMP信号通路。     

不同培养条件对绵羊卵母细胞体外成熟和凋亡的影响

目的,探讨不同温度和不同培养时间对绵羊卵母细胞体外培养,成熟和凋亡的影响,选择合适的温度和培养时间为绵羊卵母细胞进行体外成熟提供技术支持。方法:在绵羊死亡30 min之内取出卵巢4~6 h带回实验室,切割法收集卵母细胞。在5%CO_2、饱和湿度等条件相同情况下,分别在36.0℃、37.0℃、37.5℃、38.0℃、38.5℃、39℃下培养24~26 h。实验中获得的结果数据,采用t检验方法进行差异显著性分析。结果:26 h的成熟率高于其他4个时间的成熟率,在培养22 h到26 h过程中,随着培养时间的增加,卵母细胞的成熟率呈增高。但是在26 h过后,随着培养时间增加,卵母细胞的成熟率呈递减趋势,至30 h卵母细胞的成熟率明显低于22 h的成熟率。38.5℃时卵母细胞的成熟率最高,36℃是卵母细胞的凋亡率最高。卵母细胞成熟率的整体趋势是随着温度的上升呈正相关。     

FRBI降低卵巢癌K-Ras和c-Myc基因及IP3通路的研究

【目的】探讨促卵泡激素受体结合抑制剂(FRBI)对绵羊卵母细胞中K-Ras、c-Myc及FSHR mRNA和蛋白质水平的影响,进一步阐明FRBI是否通过IP3信号通路发挥作用。【方法】将卵母细胞置于10 IU/mL的FSH和不同质量浓度FRBI (0、10、20、30和40μg/mL)的体外成熟培养基中培养24 h。应用ELISA检测IVM培养液中K-Ras、c-Myc、c AMP、FSH和IP3的含量。q RT-PCR和Western-blot检测卵母细胞中FSHR mRNA和蛋白质的水平。【结果】至24 h时,随着FRBI剂量增加,COM-1组至COM-3组c-Myc质量浓度逐渐降低,COM-3显著低于FSH组(P0.05),COM-4组24 h的K-Ras质量浓度显著低于阴性对照组(CG)和FSH组(P0.05);COM组中,FSHR mRNA和蛋白表达水平随着FRBI剂量的增加而下降,高剂量组(COM-4) mRNA与蛋白质表达水平显著低于FSH组(P0.05)。cAMP和IP3含量随FRBI剂量增加而递减,COM-4组IP3显著低于CG组(P0.05)。【结论】在FSH存在下,FRBI可减少K-Ras和c-Myc的产生,抑制卵母细胞的FSHR水平,FRBI可能通过IP3通路发挥作用。