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萝卜抗菌肽基因AFP的克隆及其在大肠杆菌中的诱导表达 总被引:5,自引:2,他引:5
试验采用RT-PCR方法,从萝卜叶子中克隆得到抗菌肽基因AFP(antifungal protein)。该基因全长240个碱基,79个氨基酸。经测序证明克隆所得基因与GeneBank中发表的原序列一致。将此抗菌肽基因克隆到E. coli表达载体pET28a,在IPTG的诱导下表达出含有AFP的11.99 ODD,证明该AFP基因在原核表达系统中可以正常表达。 相似文献
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本文研究了碱性蛋白酶最佳酶解条件,确定了碱性蛋白酶水解牦牛乳酪蛋白制备抗氧化肽的最佳水解条件,通过体外消化试验检测了水解产物的抗氧化活性变化。碱性蛋白酶的最佳酶解为温度50℃和最适pH值7.5;碱性蛋白酶添加量2%、温度55℃、pH值7.5和反应时间2h,水解产物抗氧化活性最高,清除DPPH能力为55.75%。经过胃蛋白酶和胰蛋白酶体外消化试验,水解产物抗氧化活性减弱,其中胰蛋白酶对抗氧化活性影响最大,胃蛋白酶和胰蛋白酶分别消化1h后,水解产物清除DPPH能力降为30.36%。 相似文献
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pBI121-Lyz-GFP表达载体的构建及其在和田苜蓿愈伤组织中的转化 总被引:3,自引:0,他引:3
将绿色荧光蛋白(GFP)基因片段插入到pBIl21-Lyz多克隆区,构建了重组表达载体pBI121-Lyz-GFPo经Sma Ⅰ与BamH Ⅰ双酶切和PCR验证重组质粒,均能得到约750 bp的目的片段,通过进一步测序证明,GFP基因已成功地连接到pBI121-Lyz中,且重组质粒连接方向正确.利用冻融法将重组质粒导人根癌农杆菌(Agrobactcrium tumenfaciens)LBA4404,用叶盘法转化和田苜蓿(Medicago sativa L.cv.Xinjiang Daye),筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,经PCR扩增和荧光显微镜检测证明,重组基因已成功地转化到和田苜蓿愈伤组织中. 相似文献
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将绿色荧光蛋白(GFP)基因片段插入到pBI121-Lyz多克隆区,构建了重组表达载体pBIl21-Lyz-GFP。经SmaⅠ与BamHⅠ双酶切和PCR验证重组质粒,均能得到约750bp的目的片段,通过进一步测序证明,GFP基因已成功地连接到pBI121-Lyz中,且重组质粒连接方向正确。利用冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumenfaciens ) LBA4404,,用叶盘法转化和田苜蓿(Medicago sativa L. cv. Xinjiang Daye),筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,经PCR扩增和荧光显微镜检测证明,重组基因已成功地转化到和田苜蓿愈伤组织中。 相似文献
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为了研究单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)Inl A蛋白入侵细胞时各段相关功能,试验采用PCR技术扩增得到L.monocytogenes 08-5923株Inl A基因片段,测序后利用Gen Bank对Inl A氨基酸序列进行分段,分为2个基因片段,即Inl A1(1~1 488 bp)和Inl A2(1 315~2 403 bp),将其分别克隆至原核表达载体p GEX-6P-1中,并转化至宿主菌中诱导表达,表达的重组蛋白经Western-blot和间接ELISA法鉴定,用纯化的重组蛋白分别免疫家兔,并用ELISA法检测家兔多克隆抗体的特异性。结果表明:表达的2种重组蛋白分子质量分别约为79 ku和64 ku,以其制备的多克隆抗体均可与单增李斯特菌Inl A天然蛋白发生反应;2种重组蛋白均能有效诱导抗体反应,其中Inl A2(new flag)诱导产生的抗体效价较高,与单增李斯特菌Inl A天然蛋白结合能力较强。 相似文献
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应用正交设计优化紫花苜蓿愈伤组织诱导的激素配比 总被引:5,自引:2,他引:3
以MS+2,4-D(2.0mg/L)为基本培养基,附加NAA、6-BA和KT3种植物激素,采用正交试验设计法研究不同浓度激素配比对和田苜蓿,秘鲁苜蓿和甘农3号苜蓿下胚轴愈伤组织诱导的影响。结果表明:对于秘鲁苜蓿和甘农3号苜蓿,最适愈伤组织诱导的培养基均为MS+2,4-D(2.0mg/L)+6-BA(0.5mg/L)+NAA(1.0mg/L),各因素影响程度为6-BA〉NAA〉KT。对于和田苜蓿,最适愈伤组织诱导的培养基为MS+2,4-D(2.0mg/L)+6-BA(1.0mg/L)+KT(1.0mg/L)+NAA(1.0mg/L),各因素影响程度为6-BA〉KT〉NAA。 相似文献
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紫花苜蓿高频植株再生体系的建立 总被引:13,自引:3,他引:13
研究了不同品种间愈伤组织诱导及植株再生的差异.结果表明,MS+2,4-D(2.0 mg/L)+6-BA(0.5mg/L)+蔗糖0.3%+琼脂0.08%,MS+KT(0.5 mg/L)+NAA(0.01 mg/L)+蔗糖0.3%+琼脂0.08%,1/2MS+NAA(0.01 mg/L)+蔗糖0.15%+琼脂0.08%分别是紫花苜蓿的愈伤组织诱导、芽、根分化的适宜诱导培养基. 相似文献
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