栀子种子生活力的测定及其与 发芽率的相关性研究

以5 个不同产地的栀子作为试验材料,分别用TTC 染色法、BTB 指示剂、红墨水染色法测定种子的生活 力。测定不同培养床（蛭石、纱布、滤纸、沙子）和不同温度（30、25、20、15益恒温和30/20、25/15益变温）对发芽率的影 响,优化萌发条件。探讨测定栀子种子生活力的最佳方法,明确其生活力与发芽率之间的相关性。结果显示院BTB 指 示剂法是测定栀子种子生活力的最佳方法,在滤纸培养床、30益恒温培养条件下,栀子的发芽率最高。BTB 指示剂法 测定的栀子种子生活力和发芽率的相关系数为0.979,存在显著的正相关性,进一步得到栀子种子生活力（X）与发芽 率（Y）的回归方程为Y=1.219X-0.199。     

利用一测多评法同时测定栀子中6种成分含量

以栀子中的6种成分为指标,建立其他指标成分与栀子苷的相对校正因子,计算各成分的含量,实现一测多评;同时采用回归方程法测定该6种成分含量,并比较2种方法所得计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。结果表明:12批栀子中6种成分的计算值与实测值间无显著差异,利用一测多评法控制栀子的质量是准确可行的。     

贮藏时间对栀子种子生活力和发芽率的影响

对自然条件下贮藏1、4、8个月的栀子(Gardenia jasminoides Ellis)种子的发芽率、生活力和含水量进行了测定。结果表明,采集后短时间贮藏栀子种子能保持较高的生活力和发芽率,但栀子种子寿命较短,随着贮藏时间的延长,种子的生活力、发芽率呈明显下降的趋势,种子对环境的耐受性也大大降低。生活力与贮藏时间的相关系数r=0.958,种子的生活力(Y)与贮藏时间(X)回归方程Y=102.794-3.736 X;发芽率与贮藏时间的相关系数r=0.881,种子的发芽率(W)与贮藏时间(X)回归方程W=95.740-6.368 X,均显著相关。长时间贮藏后栀子种子的含水量明显下降。     

栀子种子检验规程研究

为了规范中药药材种子市场,保证栀子种子的质量,研究建立栀子种子的检验方法。参考国际种子检验规程和中国农作物种子检验规程的方法,对栀子种子扦样、真实性、净度、发芽率、含水量、生活力及千粒质量7项指标进行研究,确定可控指标的标准检验方法。结果表明:扦样时种子批的最大总质量可选为5 000 g,送检样品的质量为800 g;在进行净度、水分和真实性分析时扦样样品的质量不应超过100 g。其中的真实性鉴定可利用栀子种子外观结构、大小和颜色等形态特征进行;净度分析可按照GB/T 3543.1—1995《农作物种子检验规程总则》中的相关方法进行;发芽率的测定用滤纸,在30℃下进行恒温处理;种子含水量的测定在将未粉碎的种子高温烘干1.5 h后进行;生活力的测定用BTB法,浸种时间为2 h,浓度为0.1%,显色时间为40 min;千粒质量的测定用五百粒法。综合研究结果,本规程可用作栀子种子质量检验的依据。     

栀子种子质量标准研究

为制定栀子种子质量标准,对收集的55份栀子种子进行净度、发芽率、千粒重、含水量、生活力的测定,采用SPSS 13.0软件,利用K类中心聚类分析方法制定质量标准。结果表明,栀子种子被分为三级,以发芽率、生活力、千粒重作为主要的分级标准,净度和含水量作为次要的标准,其中净度≥82.09%、发芽率≥72.75%、千粒重≥4.12 g、生活力≥97.83%、含水量≤10.24%为一级品;净度75.65%~82.09%、发芽率66.83%~72.75%、千粒重3.30~4.12 g、生活力96.80%~97.83%、含水量10.24%~10.28%为二级品;净度62.21%~75.65%、发芽率57.80%~66.83%、千粒重2.58~3.30 g、生活力<96.80%、含水量≥10.28%为三级品,一级、二级为合格品,三级为不合格品。     

中药栀子的研究现状

我国栀子产量丰富,主要含挥发油类和环烯醚萜类等多种化学成分,显现出十分丰富的药理活性。近些年来,国内外学者对栀子丰富的资源状况和在医药领域中的广泛应用进行了研究;该文从化学成分以及药理作用等方面对国内外栀子的研究进展进行简要综述,为栀子的进一步开发利用提供依据。     

栀子种子萌发过程中的生理生化变化

在实验室条件下,对不同萌发阶段的栀子(Gardenia jasminoides Ellis)种子进行可溶性糖、粗脂肪、淀粉、可溶性蛋白、游离氨基酸含量等生理指标的动态变化测定,以探讨栀子种子的萌发机制。结果表明,栀子种子萌发过程中粗脂肪首先被分解利用,其转化为其他营养物质;随后可溶性糖、淀粉、游离氨基酸等营养物质在相关酶的作用下逐步分解,为胚的生长提供氮源、碳源和能量;蛋白质最后被动员。试验发现种子中的氨基酸存在2个大量积累的阶段,可能是为后期的组织生长、生化反应准备基础物质。因而确定,粗脂肪的分解为栀子种子萌发的标志。     

猪流行性腹泻病毒荧光抗体的制备及应用

本研究旨在建立一种可辅助猪流行性腹泻病毒（PEDV）分离鉴定的直接荧光抗体检测方法。借助基因工程技术融合表达PEDV S1基因中和抗原表位区域（COE）,层析柱法纯化兔源免疫球蛋白IgG,搅拌法标记荧光素。通过Western blotting和动物免疫试验测定表达融合蛋白的抗原性,间接ELISA方法测定免疫后的抗体效价,直接免疫荧光法测定标记荧光抗体的特异性,梯度稀释方法测定标记抗体的最佳工作浓度。结果显示,本研究成功将423 bp的S1基因中和抗原表位COE进行融合表达,表达蛋白大小约40 ku,蛋白命名为pGEX-6P/COE;Western blotting检测结果表明,融合蛋白具有良好的反应原性;ELISA检测结果显示,免疫后35 d的血清抗体效价达1：25 600;与猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PoRV）、猪瘟病毒（CSFV）及猪细小病毒（PPV）等均无非特异性反应,标记的荧光抗体具有良好的特异性,最佳工作稀释度为1：32~1：64。综上所述,本试验制备的直接免疫荧光抗体可用于细胞平台上的PEDV快速检测,能直观地提供相关检测数据,对于病毒分离过程的取舍具有重要指导意义。     

栀子种子萌发条件优化及萌发抑制物的初步研究

【目的】探讨栀子种子萌发受抑制的原因及抑制物存在的部位,寻求提高发芽率的最佳方法,为其人工栽培提供参考。【方法】以江西樟树和安徽亳州两个栀子主产地的栀子果实为材料,探讨浓硫酸浸泡2~24 h对栀子种子吸水率的影响;研究栀子种子、果肉和果皮甲醇提取液(0.005~0.050 g/mL)对白菜种子发芽率和幼苗生长的抑制作用;测定浓硫酸、赤霉素(0~1.5 g/mL)和生长素(0.1~5.0 g/mL)、不同温度(15.0~30.0℃)和发芽床(蛭石、纱布、滤纸、湿沙)等处理的栀子种子发芽率。【结果】浓硫酸处理后不同产地栀子种子的吸水率普遍提高,达到饱和时其种子平均吸水率高于未酸蚀种子34.31%。果肉甲醇浸提液对白菜种子发芽的抑制作用更高。随着栀子果皮或种子的甲醇浸提液浓度的增加,白菜种子萌发势和发芽率呈缓慢下降趋势;经0.005~0.015 g/mL果肉甲醇浸提液处理的白菜种子萌发势和发芽率缓慢下降,但当大于0.015 g/mL时,白菜种子萌发势和发芽率急剧降低;随着果实甲醇提取液浓度的提高,白菜发芽种子根明显变短,芽缩短,长势变弱,以果肉的甲醇提取液抑制物作用最强,其次为果皮、种子;此外,提取液对根的抑制作用强于对芽的抑制作用。浓硫酸处理的栀子种子发芽率为零,且种子极易霉变。随着生长素浓度的增加,栀子种子发芽率明显降低,种子出现发黑现象。在0.3~1.2 g/mL赤霉素范围内时,随着赤霉素浓度的提高,栀子发芽率逐渐升高,其中以1.2 g/mL赤霉素的发芽率最高。在20~30℃范围内,栀子种子有较高的发芽率,而在20℃以下,发芽率极低。在30℃最适温度条件下,以滤纸的种子发芽率和发芽势最高,其次为湿沙、纱布、蛭石。【结论】栀子果肉和果皮中均存在抑制种子萌发的物质,是抑制种子萌发的首要因素。栀子果皮、种子和果肉中抑制白菜种子萌发的化学物质种类或数量可能不同。浓硫酸、生长素对栀子种子发芽具有抑制作用,赤霉素则具有促进作用。栀子种子的最适发芽条件为:用1.2 mg/mL赤霉素避光浸泡48 h后,在滤纸培养床上30℃恒温避光培养。     

猪流行性腹泻病毒荧光抗体的制备及应用

本研究旨在建立一种可辅助猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离鉴定的直接荧光抗体检测方法。借助基因工程技术融合表达PEDVS1基因中和抗原表位区域(COE),层析柱法纯化兔源免疫球蛋白IgG,搅拌法标记荧光素。通过Western blotting和动物免疫试验测定表达融合蛋白的抗原性,间接ELISA方法测定免疫后的抗体效价,直接免疫荧光法测定标记荧光抗体的特异性,梯度稀释方法测定标记抗体的最佳工作浓度。结果显示,本研究成功将423bp的S1基因中和抗原表位COE进行融合表达,表达蛋白大小约40ku,蛋白命名为pGEX-6P/COE;Western blotting检测结果表明,融合蛋白具有良好的反应原性;ELISA检测结果显示,免疫后35d的血清抗体效价达1∶25 600;与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪瘟病毒(CSFV)及猪细小病毒(PPV)等均无非特异性反应,标记的荧光抗体具有良好的特异性,最佳工作稀释度为1∶32~1∶64。综上所述,本试验制备的直接免疫荧光抗体可用于细胞平台上的PEDV快速检测,能直观地提供相关检测数据,对于病毒分离过程的取舍具有重要指导意义。