外泌体microRNA在猪成熟和闭锁卵泡中的表达差异及功能分析

【目的】通过分析成熟卵泡液外泌体（mature follicular fiuid Exosomes, mffEXs）和闭锁卵泡液外泌体（atretic follicular fiuid Exosomes, affEXs）miRNA的表达差异,探索卵泡液外泌体（EXs）miRNA在卵泡发育和闭锁过程中的调控作用。【方法】本研究通过抽提4—6 mm猪成熟发育和闭锁卵泡的卵泡液分离外泌体,进行粒径分析及Western Blot检测对EXs进行鉴定,接下来对特征性EXs携带的miRNA测序和功能富集分析,筛选关键信号通路和差异基因。最后,将mffEXs和affEXs作为添加剂进行颗粒细胞培养,利用Q-PCR检测技术分析关键基因的表达,验证两类卵泡液内EXs miRNA在卵泡发育中的调控功能。【结果】成功分离了mffEXs和affEXs,对比mffEXs测序结果,affEXs中有90个miRNA上调表达,220个miRNA下调表达,表明了卵泡液中的miRNA表达水平与调控卵泡发育有关;KEGG富集分析结果显示两类卵泡的差异信号通路主要集中在Ras、cAMP、P53和MAPK等信号通路,涉及调控卵母细胞发育、减数分裂以及颗粒细胞细胞周期等生物学功能。在闭锁卵泡中,上调表达的ssc-let-7a和ssc-miR-133a-3p分别潜在靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK1）和胰岛素生长因子（IGF1）,抑制了G1和G2/M期的运转和类固醇激素代谢,促使颗粒细胞周期运转受阻和颗粒细胞凋亡,引起卵泡闭锁的发生;下调的ssc-miR-21-5p潜在靶向肿瘤抑癌基因（P53）,抑制细胞周期运转,促使颗粒细胞凋亡。在体外培养的颗粒细胞中分别添加mffEXs和affEXs,Q-PCR结果显示CDK1在mffEXs中显著上调表达,而P53显著下调表达,表明了测序分析结果的可靠性。这些结果均显示了affEXs中miRNA表达水平的变化促使颗粒细胞凋亡和细胞周期阻滞,引起卵泡闭锁。【结论】猪affEXs携带miRNA增加了对CDK1、IGF1和P53的表达调控,抑制颗粒细胞细胞周期运转和类固醇激素代谢等信号通路,引起颗粒细胞凋亡,导致卵泡闭锁。     

超大城市外围乡村地域功能的演化路径及定位建议

掌握功能演化规律，合理确定功能定位，有助于乡村多元价值的挖掘和实现，是乡村地域高质量发展的前提。研究以超大城市北京的外围乡村地域作为典型案例，基于乡村地域功能的内涵和分类，构建了适用于长时间序列乡村地域功能强度测度的评价指标体系，测度和识别了2000—2020年北京不同乡村地域的功能强度及功能结构，分析和总结了研究期间北京乡村地域的功能结构演化过程及形成路径。结果表明：1）超大城市乡村地域不同功能的强度呈现出显著的区域差异，功能结构整体呈现从单一优势功能主导向多种优势功能主导的演化趋势；2）功能结构能够反映不同类型乡村地域发展的差异，基于功能结构的演化特征，可以将超大城市外围乡村地域的功能结构演化过程归纳为“功能强化升级式路径”、“功能调整转换式路径”“功能综合完善式路径”3类发展路径；3）强化生活服务功能是当前城乡融合发展目标下推动超大城市外围乡村地域功能多元化和高质量发展的首要举措；4）通过分析优势功能及功能结构的演化过程，可以明确不同乡村地域的发展特征并指导其功能定位的制定，有利于分类推动超大城市外围乡村地域的多元化发展。研究结果丰富了乡村多功能理论的典型地域案例，可为超大城市外围乡村地域的功能定位设定及发展路径的决策和实践提供参考。     

贵州蛋鸡产业发展概况及面临的问题与建议

近30年来贵州蛋鸡专业化养殖发展较快,在养殖规模、数量、专业化水平及装备自动化等方面均发生了重大变化,到2020年养殖总量约2500万羽,但在生产水平、疫病防控、产品质量安全控制、专业人才储备及服务体系建设等方面与国内较发达地区比较差距明显。文章就贵州蛋鸡产业发展概况、面临的问题进行分析并提出发展建议,拟对推动贵州蛋鸡产业振兴与高效健康发展,以及良种、良法、良技的推广与服务方面提供参考。