真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP的构建及高效转染细胞的筛选

为了构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP,并筛选出Lipofectamine 2000介导的高效转染细胞,本试验将柔嫩艾美尔球虫假定蛋白(Et HP)基因扩增后插入真核荧光表达载体pEGFP-N1,构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP;测序成功后,用Lipofectamine 2000介导pEGFP-N1-Et HP转染4种细胞即Vero、DF-1、BHK、HD-11;用Western blot检测确定Et HP蛋白在4种细胞内的表达,并观察转染48 h后荧光表达情况,计算5个视野内带有绿色荧光的细胞数占细胞总数的比例,从而比较质粒与Lipofectamine 2000比例不同时4种细胞的转染效率[转染效率/%=(带有绿色荧光的细胞数/细胞总数)×100%]。测序结果显示,pEGFP-N1-Et HP构建成功。Western blot检测显示,Et HP蛋白在4种细胞中均成功表达;荧光显微镜观察到4种细胞转染后48 h均出现绿色荧光,表明重组质粒pEGFP-N1-Et HP成功表达。通过转染效率的比较,发现DF-1细胞转染效率均显著高于其他细胞(P<0.0...     

堆型艾美耳球虫裂殖子外分泌蛋白对细胞凋亡的抑制作用

为了研究堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)裂殖子的外分泌蛋白对马-达氏牛肾(MDBK)细胞凋亡的抑制作用,本试验建立Transwell小室间接共培养体系,即将E.acervulina裂殖子与MDBK细胞共培养,采用流式细胞术分别检测共培养1.5、3和6 h MDBK细胞的凋亡情况,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)对共培养6 h后的细胞上清液中的成分进行鉴定。结果显示,1.5、3和6 h共培养组MDBK细胞的总细胞凋亡率分别为(5.92±0.19)%、(8.13±0.32)%和(11.57±0.37)%,与对照组相比,总细胞凋亡率均极显著降低(P<0.01)。LC-MS/MS分析共鉴定到65个E.acervulina的外分泌蛋白,包括热休克蛋白、微线蛋白、能量代谢酶分子、蛋白磷酸酶分子和未知功能蛋白等。结果表明,E.acervulina裂殖子外分泌蛋白可抑制MDBK细胞凋亡,具体哪种蛋白在抑制细胞凋亡中发挥作用有待后续进一步研究。     

基于Sentinel-2多时相影像的果树种植区遥感提取

为提取果树的空间分布信息,以果树生长期内不同月份的Sentinel-2多光谱遥感影像为数据源,以大沙河流域果树为研究对象,通过分析不同月份的光谱信息得出最佳监测时期,并在此基础上,选择不同时期的5种植被指数[归一化植被指数(NDVI)、比值植被指数(RVI)、增强型植被指数(EVI)、结构密集型色素指数(SIPI)和归一化水指数(NDWI)],结合机器学习技术构建决策树提取模型。结果发现,3、4、7、8月份的影像适于果树面积提取。通过Feature_importances_属性筛选出贡献度高的不同时期的植被指数作为输入特征,结合超参数学习曲线和网格搜索技术确定决策树模型的Max_depth和Min_samples_leaf参数分别为5和10时模型的效果最佳。参数调整后绘制决策树模型,模型在训练集和测试集上的精度分别达到了0.919 4和0.875 1。提取结果表明,研究区内的果树主要种植在大沙河两岸,东部与西北部的果树种植地块较为零碎,总的果树种植面积为6 838 hm²。在验证样本的基础上,通过混淆矩阵计算提取结果的精度,结果显示,Kappa系数为0.87,果树种植区提取的用户精度和制图精度分别为92.91%和90.77%。结果说明,本文所提出的方法适用于大区域果树的遥感提取,可为基于中高分辨率遥感影像的果树种植区监测提供有效的技术手段。     

不同抗重茬自根砧富士植物学特性和果实性状差异分析

正良好的砧木是果树健康发育、丰产优质的保证,苹果砧木类型对嫁接其上的品种有较大的影响,砧木不同,植株整形修剪方式、管理模式和果实品质也存在较大差异。山东省烟台市农业科学研究院以八棱海棠实生苗为材料,通过重茬地硬枝扦插的方式,筛选出342份在重茬地能够扦插成活、长势健壮的营养系砧木类型。2012年春,在     

外源过氧化氢对草莓花芽生理生化的影响

探究外源H₂O₂处理对草莓花芽生长及生理的影响，以期为草莓促早栽培提供一定的理论依据。试验以妙香7号草莓为研究对象，分别设置3个H₂O₂浓度(5、10、15 mmol/L)和3个持续喷施时间(5、10、15 d),加上清水对照，共10个处理，测定不同处理下花序形态表现及生理特性。结果表明：现蕾期，H₂O₂浓度为5 mmol/L水平下的现蕾比例超过了50%,显著高于其他处理；经过H₂O₂处理后的花序有明显的缩短；外源H₂O₂处理促进了活性氧代谢，O^-₂·含量迅速增加，丙二醛含量降低，激活了保护酶系，SOD、POD、CAT活性显著增加，有效清除了活性氧；SOD活性方面，5-5、5-10、10-10、15-10处理均高于其他处理组合；POD活性方面，5-5、5-10、5-15、10-10处理均高于其他组合；CAT活性方面，5-10、...     

巨型艾美耳球虫在4种细胞系中培养的比较

为了选择适宜巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)培养的细胞系，本试验首先用DEAE-52纤维素纯化E.maxima第3代裂殖子，然后将其与不同传代细胞系叙利亚幼地鼠肾(BHK)细胞、鸡胚成纤维(DF-1)细胞、猪肾(PK-15)细胞、非洲绿猴肾(Vero)细胞分别在37℃和41℃培养，每隔15 min进行苏木精-伊红(H.E.)染色比较裂殖子入侵4种细胞所需时长；将裂殖子与4种细胞培养12 h,利用H.E.染色方法比较裂殖子入侵4种细胞的活力；通过比较裂殖子接种时长和接种剂量的试验筛选裂殖子入侵DF-1细胞的最佳培养条件。结果显示，在41℃培养温度下裂殖子入侵所需时长更短；在37℃和41℃培养温度下，裂殖子对DF-1细胞的入侵率均显著高于其他3种细胞(P<0.05),裂殖子在与4种细胞培养期间均发育为裂殖体并释放出裂殖子，但未发育成卵囊；裂殖子接种DF-1细胞6 h后入侵率极显著高于4 h(P<0.01),接种10 h入侵率最高，但与8 h无显著性差异(P>0.05);当细胞数∶裂殖子数为1∶2.5时入侵率极显著增加(P<0.01);在BHK、DF-1...     

酵母细胞壁多糖对柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡血清抗氧化能力的影响

【目的】旨在评价酵母细胞壁多糖对柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡血清抗氧化能力的影响。【方法】选取1日龄健康雏鸡180只，随机分为阴性对照组（雏鸡基础日粮+不攻虫）、阳性对照组（雏鸡基础日粮+攻虫）、酵母细胞壁多糖低剂量组（雏鸡基础日粮+酵母细胞壁多糖500mg/kg+攻虫）、酵母细胞壁多糖中剂量组（雏鸡基础日粮+酵母细胞壁多糖750mg/kg+攻虫）和酵母细胞壁多糖高剂量组（雏鸡基础日粮+酵母细胞壁多糖1 000mg/kg+攻虫）。14日龄时，除阴性对照组外其余各组雏鸡经口感染5 000个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊。分别于21日龄和28日龄时，心脏采血后分离血清，采用酶联免疫吸附法检测过氧化氢酶活性、总超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛的含量。于28日龄时摘取各组盲肠并石蜡包埋，切片后HE染色，在显微镜下观察盲肠的病理变化。【结果】与阳性对照组相比，酵母细胞壁多糖可以缓解柔嫩艾美耳球虫引起的盲肠病变，还可以显著提高同日龄柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡血清中的谷胱甘肽过氧化物酶活性、过氧化氢酶活性和超氧化物歧化酶活性（P<0.05）且呈现一定正相关；显著降低其血清中丙二醛含量（P&l...