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为研究准噶尔雅罗鱼的遗传多样性,对ISSR-PCR的反应条件进行了优化和适合引物的筛选,采用正交设计方法,选用L9(3(4))正交表,以准噶尔雅罗鱼的基因组DNA为模板,对影响PCR反应较大的4个因素:Taq酶、Mg(2+)、dNTPs、引物在3个水平上进行优化试验,得到准噶尔雅罗鱼最优ISSR-PCR反应体系:25μL反应体系中含有1×PCR buffer、0.5 UTaq酶、3.0mmol/LMgCl2、250μmol/LdNTPs、0.75μmol/L引物、DNA模板30 ng.利用优化体系从32条引物中筛选得到13条适用引物,并确定了各引物最佳退火温度. 相似文献
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