茶树Ⅱ型核糖体失活蛋白基因CsRIP1和CsRIP2的克隆与表达分析

【目的】克隆茶树Ⅱ型核糖体失活蛋白基因CsRIP1和CsRIP2,探讨CsRIPs基因的组织表达特异性以及假眼小绿叶蝉和机械伤害处理对其表达的影响。【方法】Cs-Ev2(Gen Bank登录号:GH618807)为一受假眼小绿叶蝉取食诱导的茶树Ⅱ型核糖体失活蛋白基因的c DNA片段,利用RACE技术克隆该基因的全长c DNA,命名为CsRIP1(Gen Bank登录号:FJ648831)。利用RT-PCR技术从茶树子叶中分离出一个新的Ⅱ型核糖体失活蛋白基因的c DNA序列,命名为CsRIP2(Gen Bank登录号:GU951535)。利用PCR技术克隆CsRIPs的基因组序列。设计基因特异性引物,利用Real-time qRT-PCR技术检测CsRIPs的组织表达特异性,以及在叶片中假眼小绿叶蝉和机械伤害处理对其表达的影响。【结果】CsRIP1和CsRIP2的序列一致性为98%,都含有一个1 713 bp的开放阅读框,编码570个氨基酸残基,但是它们具有不同的3’非翻译区。CsRIP1和CsRIP2由信号肽序列、1个RIP结构域、链接肽和2个RBL结构域组成。CsRIPs与其他Ⅱ型RIPs具有较高的序列一致性,Ⅱ型RIPs保守的氨基酸残基,包括构成A链N-糖苷酶活性位点的氨基酸残基、B链中形成寡糖链结合位点的氨基酸残基、形成链间和链内二硫键的半胱氨酸残基以及RBL结构域中的Qx W基序,均出现在CsRIPs相应的位置上。系统进化树分析结果显示,同一物种的Ⅱ型RIPs首先聚类合并,2个CsRIP与樟的Ⅱ型RIPs聚为一支。比较CsRIPs的c DNA序列和基因组序列,发现它们的基因组序列不含内含子。CsRIPs基因的表达具有组织特异性,CsRIP1在叶片中的表达水平最高,在子叶中的表达水平最低,而CsRIP2在子叶中的表达水平最高,在叶片中的表达水平最低。在叶片中,CsRIP1和CsRIP2的表达均受假眼小绿叶蝉取食的强烈诱导,并且其表达水平随着取食时间的增加而逐渐增加,取食48 h后,它们的表达水平大约分别是对照的120和100倍。在叶片中,CsRIPs基因的表达也受机械伤害处理的诱导,CsRIP1的转录水平在处理后6 h达到最大值,CsRIP2在处理后6 h表达水平显著升高,12 h达到最大值。【结论】克隆茶树的2个Ⅱ型核糖体失活蛋白基因,它们可能参与茶树的防卫反应,且已发生亚功能化。进一步分析这2个基因的启动子,可以加深对CsRIPs基因转录调控以及RIPs的生物学功能的理解。     

茶树轮斑病病原菌毒素生物测定方法研究

[目的]比较不同生物测定方法在茶树轮斑病病原菌毒素生物检测上的敏感性,筛选其中较好的方法。[方法]用叶片浸渍法、针刺法、涂抹法、根伸长测定法、根冠细胞分析法等生物测定方法测试10种非寄主植物叶片和6种非寄主植物根对茶树轮斑病病原菌毒素的敏感性。[结果]茶树轮斑病病原菌毒素原液对非寄主植物的离体叶片都有致病作用,不同植物反应不同;6种生物测定方法中根冠细胞分析法效果较好。[结论]试验表明根冠细胞分析法快速、简便、精确,是一种能较好地检测茶树轮斑病病原菌毒素毒性的生物测定方法。朱涛（1976一）,女,河南平顶山人,在读硕士,讲师,从事生     

从茶树幼苗中分离茶尺蠖取食诱导的基因

 通过抑制差减杂交、差异筛选和实时荧光定量RT-PCR分析，从茶树叶片中分离出19个受茶尺蠖取食诱导的基因，所分离的基因参与茉莉酸（jasmonic acid，JA）的生物合成，细胞壁修饰，次生代谢产物的合成，糖类代谢，病原菌抗性反应，氧化胁迫保护等，其中15个基因在茶树中首次被分离，4个基因在研究植物与昆虫相互作用时首次被发现。研究结果表明茶尺蠖取食激活一系列抗性相关基因，诱导茶树的防御反应。