稻曲病菌侵染水稻颖花的酵母双杂交cDNA文库构建与应用

【目的】近年来稻曲病日益严重,但目前对稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)与水稻相互作用机制仍不清楚。论文旨在利用水稻感病颖花材料构建酵母双杂交文库并筛选稻曲病菌效应因子互作蛋白,为解析稻曲病菌侵染水稻机制提供理论基础。【方法】以感病水稻Chuannong H2S为试验材料,在水稻破口前5—7 d左右,从水稻穗中上部接种PSB摇培7 d的稻曲病菌荧光标记菌株P4,接种13 d后取颖花进行激光共聚焦观察,收集感病颖花。提取感病颖花总RNA,使用含有Oligo(dT)的接头引物反转录cDNA第一链,并PCR扩增ds cDNA,通过琼脂糖凝胶电泳切胶回收ds cDNA片段,与载体p GADT7-Rec进行同源重组,转化酵母菌株Y187构建酵母双杂交cDNA文库。然后用稻曲病菌效应因子Uv_1261基因构建诱饵载体,将诱饵载体转化入Y2HGold酵母菌株,通过酵母双杂交自激活验证后以该诱饵载体筛选酵母双杂交文库,最终在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上筛选出生长状况良好的蓝色单菌落,经测序得到候选互作蛋白的序列,通过NCBI在线网站进行Blast分析和Uniprot在线网站进行gene ontology(GO)注释。【结果】经检测,文库滴度为5.7×108 cfu/mL,平均插入片段大小为750 bp,表明稻曲病菌侵染水稻颖花cDNA文库质量较高。用Uv_1261构建诱饵载体,转化Y2HGold后,转化菌可在SD/-Trp、SD/-Trp/X-α-Gal平板上生长,不能在SD/-Trp/X-α-Gal/Ab A平板上生长,表明Uv_1261无自激活现象。以该诱饵载体筛选文库,对筛选到的候选互作蛋白进行测序验证并Blast分析获得了56个来自稻曲病菌或水稻的候选互作蛋白,其中有28个候选互作蛋白来自稻曲病菌,有16个来自水稻,以及12个未知蛋白。经GO注释显示,来自稻曲病菌中的候选互作蛋白参与了17个生物过程,包括翻译、代谢过程、氧化还原及胞内氨基酸合成等;分子功能包括金属离子结合活性、水解酶活性及ATP结合活性等;细胞组分包括核糖体、细胞质及线粒体等。来自水稻中的候选互作蛋白参与了11个生物过程,包括蛋白质去磷酸化、糖代谢及翻译等;分子功能包括金属离子结合活性、核苷酸结合活性及转移酶活性等;细胞组分包括核糖体、膜及细胞核等。【结论】该cDNA文库质量较好,能成功地用于稻曲病菌效应蛋白的互作蛋白筛选,可为研究稻曲病菌与水稻相互作用的分子机制提供重要资源。     

大连植物检疫圃筹建中的一些设想

大连植物检疫圃第一批工程的建设近完工,如果不出大问题,可望在年内完工。经过长时间的努力,我国第一个植物检疫圃将在大连诞生。这将在我国植物检疫工作中产生深远影响。在《植物检疫》1980年第一期的编后感中曾写道:“检疫苗圃我们已提倡了许多年,但可以说至今基本上还没有搞出个样子来。现在看来,要把植物检疫工作全面搞好,非将植物检疫苗圃搞好不可,从这几篇资料(关于介绍国外植物检疫圃     

植物检疫圃的灭菌处理

灭菌处理是植物病害研究中不可缺少的环节。检疫圃是病害检疫的重要场所,因此,需要做好灭菌处理,而且在某些环节上要求得更严格。检疫圃的灭菌处理有许多方法和普通灭菌处理是相同的。但有些灭菌处理,有它的特殊之处。特别是土壤消毒、温室用品消毒和病株销毁等方面。所以就这三方面谈一谈我们的工作情况。土壤消毒因为检疫圃检疫是生长期检疫,所以必须准备植物赖以生存的基物,当然土壤是最简单也是最常用的一种。土壤消毒有它的特点,也有它的难     

对我国开展检疫圃检疫工作的看法

植物隔离检疫圃在植物检疫中占有非常重要的地位,我国在这方面刚刚起步,中国植保学会植物检疫协会为在我国建成适合我国国情的植物隔离检疫圃体系,召开了这次研讨会。本刊开辟《入境后隔离检疫》专栏,选登一部分有代表性的论文,同时在其他栏目中也刊登了几篇以满足广大读者的需要。希望继续收到这方面的来稿对这一问题进行探讨。