不同方法对STO细胞冻存效果的影响

[目的]建立一种更优化的STO细胞冷冻保存方法.[方法]STO细胞传至第3代后,调节其浓度至2.09×105个/mL,开展冷冻保存试验.Ⅰ组将STO细胞置于4℃下平衡,1 h后转入-20℃下,12 h后将其转至液氮中保存;Ⅱ组将STO细胞装入已注入250 mL 95％乙醇的降温器后,立即转至-70℃下,12 h后再将其转至液氮中保存;Ⅲ组将STO细胞悬液于液氮面上方10 cm处平衡20 min,然后将其缓缓转至液氮中.同时,设Ⅳ组为对照组,即STO细胞不进行冷冻处理.在液氮中保存30 d后进行解冻,以STO细胞的回收率、存活率和生长情况为研究指标,通过MTT法进行STO细胞冻存效果评价.[结果]经冷冻处理后,3种方法STO细胞解冻后回收率和存活率均存在显著差异(P<0.05).Ⅱ组细胞解冻后细胞回收率低于Ⅰ组、高于Ⅲ组,但细胞存活率最高(84.91％).与Ⅰ组和Ⅲ组相比,Ⅱ组STO细胞冻存方法不仅能保证冷冻效果,而且可以回收更多的细胞.Ⅱ组STO细胞复苏后生长相对缓慢,但STO细胞经培养后可恢复至冷冻前的生长状态.Ⅰ组和Ⅱ组复苏后STO细胞的增殖速度较快,且增殖率基本相同,而Ⅲ组细胞的增殖速度较慢.[结论]Ⅱ组STO细胞于-70℃冰箱中平衡过夜,再转移至液氮中超低温冷冻是较为理想的保存方法.