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构建了中国被毛孢有性发育启动前后的cDNA文库。采用Total RNA Kit Ⅰ法提取总RNA,磁珠法分离mRNA,反转录合成双链cDNA。获得的cDNA经蛋白酶K与SfiⅠ消化酶切并纯化,连接到载体pUC19上,采用电转化法将其转化到感受态细胞DH-5α中。之后测定文库的克隆数、重组率、插入片段大小。结果显示,文库1含1.09×106个重组体,蓝白斑实验显示重组率为92.5%;文库2含1.13×106个重组体,蓝白斑实验显示重组率为92%;两文库重组DNA片段的大小范围均在500~2 000 bp。说明本试验中所提取的 RNA 其纯度很好,完全可以达到后续研究的要求。 相似文献
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应用vWF标记免疫组化法观察骨髓新生血管情况及ELISA法测定血浆内皮抑素(ES)含量,研究急慢性白血病患者骨髓新生血管情况及血浆血管生成拮抗因子ES的变化情况。结果表明:急性白血病(AL)和慢性白血病(CML)患者骨髓微血密度(MVD)较对照组极显著增高,治疗后获缓解者骨髓MVD显著降低,且接近正常水平;AL和CML血浆ES显著高于对照组,化疗后获完全缓解(CR)的AL和CML血浆ES含量均降至正常水平。说明初诊白血病患者存在骨髓新生血管及血管生成拮抗因子ES水平的增高,白血病患者体内ES的增加很可能对机体具有一种保护作用,其含量的变化可能与白血病患者的预后有关。 相似文献
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以肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP1为研究对象,构建慢病毒介导的单极纺锤体1结合蛋白2 (MOB2)稳定干扰表达的细胞模型;应用RT-qPCR和Western blotting方法检测相关基因的表达水平;利用Transwell细胞迁移试验和自噬流试验检测MOB2敲低表达对细胞迁移和细胞自噬的影响。结果表明:MOB2敲低表达可抑制肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP1的迁移,促进细胞自噬; MOB2敲低表达可上调NDR1/2的磷酸化水平(pT444/442)和YAP的磷酸化水平(pS127YAP),下调受YAP转录调控的下游靶基因CTGF和CYR61的表达; MOB2敲低表达可上调ULK1、LC3BII,下调SQSTM1/p62,促进细胞自噬流的形成。这一研究说明MOB2敲低表达可通过促进NDR1/2的磷酸化而负调控YAP的转录激活活性,调控下游与细胞迁移和自噬相关基因的表达,影响肝癌细胞的迁移和细胞自噬过程。 相似文献
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取30例强直性脊柱炎(AS)患者和30例健康对照组外周血清和膝关节滑液,采用放射性免疫法和双抗体夹心酶免疫吸附法分析瘦素(leptin)、IL-17、TNF-α、IL-6含量,探讨leptin、Th17细胞因子与AS病情活动的相关性。结果表明:AS患者外周血和膝关节滑液中leptin、IL-17、TNF-α、IL-6含量比健康对照组明显升高(P0.01)。AS外周血和关节滑液中leptin的表达水平与IL-17、IL-6呈显著相关(P0.01),与TNF-α表达相关不显著。AS患者外周血清和关节滑液中leptin、IL-17、IL-6平均表达水平与AS患者的血沉、C-反应蛋白、Bath强直性脊柱炎活动指数呈显著相关(P0.05),TNF-α的表达水平与AS病情活动指标相关不显著。说明leptin及Th17相关细胞因子在AS患者外周血和关节滑液中明显升高,可能直接参与了AS关节炎症过程。 相似文献