离子阱液质联用仪应用于植物叶片游离氨基酸快速分析方法的建立

建立一种液相色谱-离子阱串联质谱(LC-MS-MS)同时分析植物组织中23种游离氨基酸的方法。植物样品经盐酸-乙醇法一步提取后直接进样,无需进行衍生和固相萃取等其他前处理步骤。液相色谱采用Intertsil OSD-4C18(250mm×3.0mm)色谱柱,采用甲醇-甲酸体系进行洗脱,对23种氨基酸获得比较理想的分离效果。结果表明,该方法通用性良好、样品制备简单(一步提取,无需衍生)、灵敏度高、检出范围宽、高效快速,可以在30min内完成整个分析过程。     

大白菜胞质雄性不育系育性相关线粒体DNA片断的克隆及*序列分析

利用PCR技术从大白菜(Brassica campestrisL.ssp.Penkinsis)新型胞质雄性不育材料CMS7311的线粒体基因组中扩增出与细胞质雄性不育相关的片断,并克隆测序。序列分析表明,该片断和报道的Poli-ma-orf224序列完全相同,没有发生变异,说明CMS7311的不育机理与PolimaCMS相似,也反映了细胞质雄性不育变异的保守性。     

蚜虫内共生菌基因组DNA提取方法的比较和优化

为探究蚜虫共生菌基因组DNA的提取方案,以桃蚜为试验材料,比较了目前较为常用的4种蚜虫基因组DNA提取方法,从DNA纯度、完整性、PCR扩增效率及稳定性等方面进行了比较和评价,并通过调整蛋白酶K用量和水浴温度及时间对STE法进行了优化。结果表明,4种方法提取的蚜虫共生菌基因组DNA均可用于共生菌的PCR扩增检测;CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较高,条带较完整,稳定性相对较高,不易降解,而STE法和PCR缓冲液法操作简便,适于快速提取单头蚜虫共生菌的基因组DNA,但纯度相对较低;可根据试验条件和要求进行选择。STE法优化条件为:用30 μL STE缓冲液将蚜虫匀浆,加入1.5 μL 20 mg/mL蛋白酶K,于56 ℃水浴1.5 h;再加入0.1 μL 10 mg/L RNA酶,于37 ℃培养1 h,95 ℃下处理5 min,5 000 r/min离心3 min,将提取到的DNA于-20 ℃保存或直接用于PCR扩增。优化后的STE法可作为提取蚜虫共生菌基因组DNA经济而快捷有效的方法。     

小麦叶片营养物质与抗麦长管蚜的相关性分析

为了阐明小麦叶片营养物质与小麦抗蚜性之间的关系,观察了麦长管蚜Sitobion avenae(F.)在不同小麦品种上的选择趋性,测定其相对日均体重增长率,并采用Branford法和高效液相色谱技术分别测定了不同品种小麦叶片总蛋白、韧皮部中游离氨基酸以及可溶性糖的含量。结果表明,麦长管蚜显著趋向于铭贤169、西农889与西农1376;在铭贤169、西农889和西农1376上的成蚜相对日均体重增长率显著大于中四-有芒、小偃22;西农889叶片的总蛋白含量最高,为2 822.04μg/mL,小偃22叶片韧皮部的可溶性糖含量最高,铭贤169和西农889叶片韧皮部的游离氨基酸总含量相对较高,分别为1 424.3、1 301.1 nmol·L~(-1)·g~(-1)DW;各游离氨基酸在相对抗蚜品种中四-有芒和小偃22中的绝对含量与其抗蚜性无相关性。研究表明,中四-有芒、小偃22对麦长管蚜具有较强的抗性,植物营养在小麦抗蚜性中起到一定作用。     

小麦 TaAGL7 N基因的Real time PCR检测

为了建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR方法，测定 TaAGL7 N基因在小麦不同器官的表达水平。采用 RT PCR扩增小麦 TaAGL7 N基因片段，建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线，以18S rRNA为内参，检测小麦不同器官中的 TaAGL7 N表达水平。结果表明，标准曲线循环阈值与模板浓度有良好的线性关系，熔解曲线分别在82.8～83.6 ℃和83.1～85.6 ℃各仅有一个单峰。成功建立SYBR Green Ⅰ荧光染料实时定量PCR法，该方法具有特异度和敏感度高、 稳定性好的特点，可用于定量测定小麦中TaAGL7 N的表达水平。     

植物转录因子与作物抗逆胁迫关系的研究进展

转录调控是真核生物基因表达调控的重要机制.转录因子在植物逆境信号传递过程中起着中心调节作用,转录因子调控功能基因表达是植物应答逆境胁迫的关键,为利用基因工程创制作物抗逆新品种提供参考信息.本文概述了植物抗胁迫相关的4类转录因子(NAC类转录因子、MYB类转录因子、bZIP类转录因子和WRKY类转录因子)的结构特点和分类,并重点讨论了它们在作物抗逆胁迫中的功能.     

玉米叶片硝酸还原酶活性测定方法的优化

以玉米(Zea mays L.)自交系许178为材料,通过考察研磨方法、NADH用量、温度、pH、反应时间、显色时间对玉米叶片硝酸还原酶活性的影响获得最优试验条件。结果表明,石英砂研磨比液氮研磨测得的酶活性高;反应温度35℃、pH 7.5为较适反应条件;反应时间和显色时间均为10 min时测得的硝酸还原酶活性与标准方法相比无显著差异;还原剂NADH用量减少至一半测得的硝酸还原酶活性与标准方法无显著差异。综上所述,玉米叶片硝酸还原酶活性测定的优化处理方案为用石英砂研磨,加入0.15 m L NADH,在35℃、pH 7.5的条件下反应10 min,显色10 min。     

大白菜花蕾总RNA有效、快速提取的方法

植物细胞壁厚实且成分复杂,细胞内富含单宁、萜烯、色素、酚等次生代谢物以及蛋白质、多糖等生物大分子,这些物质不但影响提取RNA效率,而且干扰之后的逆转录、酶切实验操作(李宏和王新力,1999)。不同植物、不同组织或不同生理状态下的植物材料其细胞与组织的成分各不相同,因此,     

蚜虫蛋白质组双向电泳体系条件优化

为优化有效分离蚜虫全蛋白的双向电泳体系,以豌豆蚜Acyrthosiphon pisum (Harris)为材料,比较了不同蛋白提取方法(裂解液提取法、三氯乙酸/丙酮沉淀法、饱和酚抽提法)、蛋白上样量、IPG胶条pH梯度等条件对蚜虫全蛋白双向电泳的影响。结果表明:不同的蛋白提取方法所获得的豌豆蚜全蛋白提取率有显著差异,其中以饱和酚抽提法的提取率最高,为5.34±0.26 mg/g,且所提取的蛋白种类丰富度也优于其它2种方法;当蛋白上样量为100 μg时所得蛋白点为1 793±36个,高于其它上样量;相同条件下选用11 cm pH 3~10非线性IPG胶条时所得蛋白点为1 803±42个,优于pH 4~7的IPG胶条。表明采用饱和酚抽提法进行提取蛋白,选用11 cm pH 3~10非线性IPG胶条,以蛋白银染方法、分离胶浓度为12.5%进行双向电泳时最适蛋白上样量为100 μg,所得可识别蛋白质点最高,且重复性试验匹配率高,可用于豌豆蚜蛋白质组学研究。     

泥炭和腐泥对风沙土理化性质和白菜生长的影响

选用泥炭、腐泥及其混合物3种天然有机物料作为风沙土改良剂,进行盆栽试验,评价不同处理对白菜生长状况和风沙土性质的影响.结果表明,施入泥炭和腐泥后的风沙土利于白菜生长,单施泥炭8%～12%、或单施腐泥28%～32%效果明显,混合施入12%泥炭+28%腐泥的效果也较好,表现为风沙土的物理结构、pH有所改善,土壤中有机质、速效氮、磷、钾和腐植酸含量都有所增加;白菜的高度、根长、鲜质量和干质量明显优于对照. 因此,认为泥炭和腐泥是风沙土的优良改良剂.