布氏杆菌L7/L12和OMP31基因克隆及融合表达

本研究根据已经发表的布氏杆菌基因序列,选择种间序列极为保守的保护性抗原L7/L12、OMP31基因,依此进行PCR扩增,利用引物上设计好的限制性内切酶酶切位点进行基因重组,构建了PME290-SDLOmp高效表达载体,并转化绿脓杆菌(PAK/2pfs),通过培养得到了表达产物,对表达产物进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定,结果符合预期。本项研究为进一步开展布氏杆菌亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

牛乳铁素研究进展

牛乳铁素是由牛乳铁蛋白在酸性条件下经胃蛋白酶消化后产生的多肽,具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗炎症和免疫调节等多种生物学功能,可应用于多个方面。综述了牛乳铁素结构、功能、作用机制、制备及应用的研究进展。     

变性淀粉在冰皮预拌粉中的应用研究

冰皮预拌粉是将制作所需原料按一定的比例预先混合好的复配半成品。其操作简便、形状美观、品质稳定,适合搭配各种冰沙馅料制作。通过调整冰皮月饼中基本配方及其添加剂的用量,确定了冰皮月饼预拌粉的最佳配方为变性淀粉添加量50%,白砂糖添加量25%,植脂末添加量4%,奶粉添加量5%,葡萄糖添加量15%,食用香精添加量0.5%,碳酸钙添加量0.5%。     

重组抗菌肽LfcinB/LfampinB基因的克隆及表达载体的构建

根据GeneBank中提供的牛乳铁蛋白基因序列,设计并合成了重组LfcinB/LfampinB基因,并通过PGEM-Teasy载体扩增。酶切回收的LfcinB/LfampinB片段与中间载体pP6连接。pP6上的启动子、信号肽和调控序列与LfcinB/LfampinB共同切下,获得具有上游调控元件的PLfc/Lfa基因片段。将PLfc/Lfa与pME290表达载体连接,并转化绿脓杆菌。结果表明,本试验成功构建了重组pPLfc/Lfa表达载体。     

重组牛分支杆菌ESAT-6基因的表达与鉴定

在前期工作的基础上，构建了pGEM—TE—ESAT6重组载体，转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，经诱导表达得到了20kD左右大小的重组蛋白，SDS—PAGE／Western Blot显示该重组蛋白是上清表达。为重组ESAT-6抗原的应用奠定了基础。     

多媒体数据挖掘技术在数字图书馆馆藏资源开发利用中的应用

在数字图书馆馆藏资源开发利用当中,数据挖掘技术是一项核心技术,通过该项技术可以挖掘出长期闲置的珍贵数据资源。随着多媒体技术的不断兴起,多位学者将多媒体技术与其它软件技术进行结合,将多媒体技术与数据挖掘技术进行结合,通过利用多媒体数据挖掘技术对数字图书馆馆藏资源开发利用进行分析,为提高数字图书馆服务水平奠定基础。     

牛病毒性腹泻病毒反转录及3'-末端克隆测序方法研究

牛病毒性腹泻病毒为黄病毒科瘟病毒属代表种,其基因组为单股正链RNA,无Poly(A)尾。传统的3'-末端快速扩增方法不适用于牛病毒性腹泻病毒的3'-末端克隆测序。本研究根据牛病毒性腹泻病毒基因组3'-末端共有特征碱基,设计回文锚定引物CGend。以BVDVJZ05-1毒株为研究对象,进行了反转录及3'-末端克隆测序。结果表明,CGend的反转录效果优于随机引物和一般特异性下游引物,并且扩增得到了JZ05-1的3'-末端完整序列。本研究为瘟病毒属病毒反转录和3'-末端克隆测序提供了新思路。     

布鲁氏菌L7/L12、OMP31基因的克隆、测序及免疫原性分析

为研制鹿布鲁氏菌病工程疫苗,根据已发表的布鲁氏菌核糖体蛋白L7/L12、外膜蛋白OMP31基因设计两对引物进行扩增,PCR产物连接pGEM-Teasy载体,转化DH5α后测序,并进行基因分析。结果从布鲁氏菌疫苗株中克隆出L7/L12和OMP312个目的基因,同源分析L7/L12达97.1%,OMP31达100%,免疫原性分析可作为免疫优势抗原。     

CFNCpG对BVDV1灭活抗原的免疫佐剂效应研究

分别用CFNCpG、弗氏完全佐剂、氢氧化铝胶与BVDV1灭活抗原配制成疫苗免疫家兔,于免疫后每间隔7d检测中和抗体变化,来探讨CFNCpG对BVDV1灭活抗原的佐剂效应。试验结果表明,CFNCpG单独作为佐剂应用7d可使抗体滴度达到4.4(log_2SN_(50)),14d可达到7.0以上;与氢氧化铝胶联合可使抗体滴度在21d达到7.0以上,其佐剂水平与弗氏完全佐剂相当。有望进—步研制成为BVDV1灭活疫苗佐剂成分。     

牛分支杆菌ESAT-6/Ag85B/Mtb8.4基因与牛IL-2基因融合表达

本研究拟制备牛IL-2与牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因的融合蛋白。从患结核病鹿的肺组织中分离牛分支杆菌并提取基因组DNA,PCR扩增牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因;提取牛淋巴细胞,经总RNA提取、RT-PCR得到了IL-2基因片段。经测序鉴定后,将4个目的片段重组,构建原核表达载体,并对表达的融合蛋白进行鉴定。克隆出了牛IL-2,以及牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4基因;构建了原核表达载体pME290-SDCZ,并表达出了融合蛋白;Western印迹结果证实该重组蛋白能与抗牛分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。制备了牛IL-2与牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4融合蛋白,本研究为下一步研制重组牛结核亚单位疫苗奠定了基础。