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为建立高效、快速、准确的烤后烟叶 DNA 提取方法,采用 BioMek NXP自动化工作站与国产DNA 磁珠法提取试剂盒相结合,建立了自动化批量提取烤后烟叶基因组 DNA（作为 PCR 模板）的方法,以获取高质量的烤后烟叶 DNA 满足 PCR 检测需求。结果表明：水浴时间30 min、样本量70～80 mg、80％乙醇洗涤4次能获得 OD260／OD280为1．7～1．9,浓度大于100 ng／μL 的烤后烟叶基因组 DNA,合格率达95．8％。经 PCR 定性扩增烟草硝酸还原酶基因（NR）,该方法所提的 DNA 溶液中无 PCR 反应抑制物残留,可直接用于 PCR 定性分析。烟叶粉末经预处理,取上清液上机后约110 min 可完成96份样品的 DNA 提取工作。 相似文献
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【目的】克隆栽培烟草K326着丝粒特异组蛋白(Centromeric histone H3, CENH3)基因，并对其进行生物信息及表达特性分析，为探明NtCENH3基因的单倍体诱导功能及烟草品种快速改良提供依据。【方法】以栽培烟草K326为材料，利用同源克隆技术获取NtCENH3-1和NtCENH3-2基因的cDNA全长序列，运用生物信息学软件分析蛋白的序列特征；通过亚细胞定位技术验证基因的表达部位；利用荧光定量PCR检测NtCENH3-1和NtCENH3-2基因在烟草不同组织部位的表达情况。【结果】NtCENH3-1和NtCENH3-2包含7个外显子和6个内含子，编码区(CDS)长度分别为468 bp和471 bp,分别编码156个和157个氨基酸，蛋白的分子量分别为17.64 kDa和17.75 kDa。进化树分析表明，栽培烟草CENH3-1和CENH3-2基因分别来源于祖先种绒毛烟草和林烟草，2个基因均定位于细胞核中。RT-PCR分析显示，NtCENH3-1和NtCENH3-2在不同组织中呈差异性表达，且在雌蕊及幼嫩的果实中表达量较高。【结论】在烟草中成功克隆着丝粒特异组蛋白N... 相似文献
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