一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法

多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素.我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA.这种方法可以克服产率低和质量低的问题.RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520 μg到800 μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9.提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析（serial analysis of gene expression,SAGE）库的构建.     

水稻乙酰乳酸合成酶基因的克隆和功能分析

乙酰乳酸合成酶（ALS）是植物和微生物中亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸合成途径的一个关键酶，该基因在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值。利用生物信息学分析，自水稻中分离了ALS基因的cDNA和基因组DNA序列。序列分析表明，ALS基因没有内含子，GC碱基含量高并不对称分布。软件预测ALS基因是单拷贝基因位于第4号染色体上，Southern杂交验证了此结果。构建A岱基因的植物表达载体并转化烟草，转基因烟草通过PCR-Southern验证。EXACT-RT-PCR结果表明，水稻ALS基因在转基因烟草的叶片和根部均有转录发生。利用甲嘧磺隆进行除草剂抗性测试，和对照烟草相比转基因烟草除草剂抗性高达50mg·L^-1。