用于遗传转化的贯叶连翘组织培养系统的研究

贯叶连翘恢复生长的能力较强,用0.2%HgCl2消毒幼茎3 min建立无菌苗具有较好效果;利用MS与1/2MS作为贯叶连翘的基本培养基均有较好效果;贯叶连翘的茎和叶均易于形成愈伤组织,1.0 mg/L 6-BA 1.0 mg/L NAA不仅能较好地诱导贯叶连翘形成愈伤组织,而且能较好地诱导愈伤组织形成不定芽;6-BA对贯叶连翘不定芽的形成是必要的,但高浓度的6-BA易于导致苗玻璃化,0.1 mg/L 6-BA 0.01 mg/L NAA诱导不定芽形成具有较好效果;生长素与细胞分裂素的比例为1∶10时有利于贯叶连翘形成不定芽,但不定芽生长速度慢;生长素与细胞分裂素的比例为1∶5时不定芽形成数量少,但不定芽生长速度快;以50 mg/ml的Gent.(庆大霉素)作选择压力筛选Gent.标记的阳性转基因植株效果最好;200 mg/L的Cef.(头孢霉素)对土壤农杆菌的生长抑制效果较好。     

半夏愈伤组织的诱导与分化研究

通过对半夏无菌苗的建立、基本培养基、不同外植体、不同激素种类及配比对半夏愈伤组织的诱导和分化进行研究,结果表明,半夏离体培养采用MS培养基最好,诱导半夏产生愈伤组织以块茎效果最好,MS+2,4-D1.5 mg/L+ZET 1.5 mg/L和MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L对愈伤组织诱导的效果都好,诱导率高达82.5%;MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L和MS+2-ip 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L对苗的生长效果都好,MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L和MS+KT 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L对于生根效果都好.     

彝药青羊参离体培养庆大霉素抗性筛选

以青羊参离体培养的茎、叶及愈伤组织为材料,以不同浓度的庆大霉素为筛选压,就青羊参离体茎、叶及愈伤组织对庆大霉素的抗性水平进行浓度筛选.结果表明:庆大霉素对青羊参离体茎、叶的致死浓度为50 mg/L,对愈伤组织的致死浓度为75 mg/L.青羊参对庆大霉素极为敏感,用庆大霉素抗性基因作为标记基因,筛选转基因青羊参植株有较好效果.     

离体培养贯叶连翘对庆大霉素的敏感性

选择培养贯叶连翘的茎、叶及愈伤组织的最佳培养基配方,设置0、25、50、75、100mg／L等5个浓度梯度庆大霉素,离体培养结果显示：贯叶连翘对庆大霉素极为敏感,用庆大霉素抗性基因作为标记基因,筛选转基因贯叶连翘植株有较好效果。庆大霉素对贯叶连翘茎、叶的致死浓度为100mg/L,对愈伤组织的致死浓度为75mg/L。     

正交试验法优选贯叶连翘组织培养条件

采用正交试验法对贯叶连翘组织培养过程中生长素、细胞分裂素、外植体3因素进行优选研究.结果表明,贯叶连翘易于形成愈伤组织,愈伤组织、叶片易于分化形成不定芽,不定芽易于形成根.影响贯叶连翘愈伤组织诱导形成的主要因素是生长索、细胞分裂索、外植体,贯叶连翘愈伤组织诱导的最佳组合是贯叶连翘叶片,生长素0.5mg/L 2,4-D,细胞分裂素0.5 mg/L 6-BA.影响贯叶连翘愈伤组织诱导形成不定芽的主要因素是生长素,最优选择是0.01 mg/L2,4-D和0.01 mg/L IAA;细胞分裂索采用0.01 mg/L 6-BA、ZET、KT、2-ip以及愈伤组织来源采用根、茎、叶、芽,差异不明显.贯叶连翘叶片诱导形成不定芽过程中生长素最优选择是0.01 mg/LIBA,细胞分裂素采用6一BA、ZET、KT、2-ip差异不明显.1.0 mg/L生长素与0.1 mg/L细胞分裂素均能诱导贯叶连翘根的形成.