BmOsi9a基因在家蚕胚胎细胞周期中的功能研究

Osiris基因家族是一类昆虫特有且进化保守的基因家族。已知Osi9亚家族基因在鳞翅目昆虫中发生特异扩增,产生高度同源的6个拷贝,且表达模式也具有同步性,但该基因家族扩增机制和生物学功能未知。为了揭示BmOsi9a基因的生物学功能,本研究通过荧光定量分析和Western blot实验检测到BmOsi9a在家蚕胚胎细胞(BmE)中有表达,免疫荧光分析发现BmOsi9a主要存在于细胞质中,构建过表达及dsRNA干涉载体,结果显示过表达对细胞的表型和增殖没有显著影响,而转染干涉载体下调BmOsi9a表达则使细胞的增殖受到显著影响。利用流式细胞技术分析发现G0/G1期细胞显著增加,S期细胞则显著减少,表明BmOsi9a与BmE细胞的增殖相关。研究结果表明BmOsi9a在细胞周期过程发挥作用,为进一步阐明BmOsi9a生物学功能奠定了基础。     

芥子中甲代烯丙基异硫氰酸酯对k562细胞的抑制与诱导

从海南十字花科植物芥菜种子中提取异硫氰酸酯类化学成分甲代烯丙基异硫氰酸酯（MITC）,并将其作用于k562细胞,用MTT比色法测定增殖抑制效果,应用瑞式姬姆萨、4＇,6-二脒基-2-苯基吲哚（DA-PI）、罗丹明123染色观察细胞形态.结果表明,MITC作用k562细胞呈现一定的量效关系,MITC体积分数为120 μmol·L-1,作用时间为96 h时,抑制率达到最高,为（87.5±1.4）％.MITC作用k562细胞24,48,72,96,120 h的半数抑制体积分数（IC50）分别为250.007,100.584,39.030,54.701,88.719 μmol·L^-1.MITC处理的K562细胞出现凋亡形态特征：细胞皱缩,细胞核固缩,细胞核向内凹陷,线粒体电势下降.根据细胞形态变化初步判断MITC诱导k562细胞凋亡.     

中国梦需要发扬科学创新精神——兼论运动训练理论与三大球领域中的创新与守成

创新和守成，各自反映了一种人生哲学。“中国梦”需要发扬科学创新精神，需要培育创新种子。中国三大球本质上衰败于“守成”思想的约束；若不采纳“创新”理念，抛弃“陈训”格局的僵化管制，欲求中国三大球的崛起，是不可能的。     

急诊科护理工作中存在的常见问题及对策

目的提高患者对急诊护理工作的满意度。方法应用自行设计的调查问卷调查急诊科2008年度护理工作存在问题并于2009年采取相应的对策。结果急诊科2008年度护理存在5个常见问题包括：沟通不良、法律淡薄、服务态度不到位、责任心不强、业务技术能力欠缺,患者完全满意度为85.3%。通过分析问题,给予相应的对策,2009年度护士的护理意识及护理质量有了明显提高,患者完全满意度为96.0%,明显高于2008年度（P〈0.01）。结论及时发现急诊护理工作中存在的问题,寻找出原因并提出相应对策,可有效提高患者对护理工作的满意度。     

产碱假单胞菌产精氨酸脱亚胺酶的发酵条件优化

对产碱假单胞菌产精氨酸脱亚胺酶的发酵条件进行了优化,结果表明,产碱假单胞菌产ADI的最佳发酵条件为:10 g·L-1蔗糖为碳源,6 g·L-1蛋白胨为氮源,10 g·L-1精氨酸诱导物,4%的接种量和30%的装液量,发酵温度29℃,发酵时间24 h,摇床转速为150 r·min-1,发酵液的初始p H8.5。在此条件下,产碱假单胞菌产ADI的酶活最高。     

蜕皮激素氧化酶基因在家蚕丝腺中的表达特征及重组表达分析

昆虫蜕皮激素氧化酶(EO)是分解蜕皮激素的关键酶之一，该酶通过蜕皮激素3位异构化途径将蜕皮激素分解成3异构化蜕皮激素，从而调控蜕皮激素的滴度。课题组前期通过家蚕转录组学分析发现一个在丝腺组织特异表达的蜕皮激素氧化酶基因(EOs),为了研究该基因的时空表达模式及蛋白质功能，对丝腺蜕皮激素氧化酶基因的表达谱进行了分析，同时利用原核表达系统对其进行重组表达及分离纯化。RT-PCR和qRT-PCR检测表明，EOs在家蚕幼虫5龄期的丝腺组织特异表达，且主要在中部丝腺的前部表达；免疫荧光实验结果表明，EO不仅存在于家蚕中部丝腺细胞，而且还会分泌到丝腺腺腔中。将EOs全长cDNA克隆到pMD-19T载体中，再进一步亚克隆到原核表达载体PET-28a,然后将构建好的pET28-BmEOs质粒转入大肠埃希菌BL21中进行表达，通过SDS-PAGE检测发现在1 mmol/L IPTG诱导后的上清中有一条大小约60 kD的蛋白质条带，经Western blot检测该蛋白质可与抗体发生特异性结合，表明BmEOs被成功表达。将大量上清经过Ni亲和柱纯化后，获得了纯化的目的蛋白质。研究结果为进一步分析丝腺中蜕皮激...