小麦纹枯病生防菌株B3产生抗菌物质条件的研究

枯草芽孢杆菌Ｂ３（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）在ＮＢ，Ｋ＇Ｂ，ＬＢ，ＹＴ，Ｍ９和ＳＧ等６种培养液中产生抗菌物质的量有显著差别，以在ＮＢ中产量最大。以ＮＢ作培养基时，Ｂ３在ｐＨ５～９、温度为２０～４０℃范围内均可产生抗菌物质，而又以ｐＨ７．０和３０℃最适。定期取样测定表明，Ｂ３在培养１２～４８ｈ内产生抗菌物质逐渐增多。不同碳氮源测试结果表明，以终浓度为０．１％的葡萄糖、０．２％的甘露醇或０．２％的可溶性淀粉作碳源，０．１％的硫酸铵、氯化铵、硝酸铵或半胱氨酸作氮源有利于Ｂ３抗菌物质产生。     

植物青枯病原细菌胞外蛋白相关基因的克隆

 用含有转座子Tn5的铜绿假单胞杆菌PAO1826(pMO75∷Tn5,Km^r)诱变我国马铃薯青枯菌小种3号菌株PO41,获得6000多个胞外多糖正常产生的接合子。经SDS-PAGE电泳,筛选出2个胞外蛋白减少9种的突变株PM2644和PM239,其可以引起烟草叶片典型的过敏性反应,致病力比野生型菌株显著降低,皆为原养型菌株。Southern杂交的结果表明,突变株染色体上只有1个转座子插入位点。标记交换证明,9种胞外蛋白缺失与转座子插入相偶联的频率为100%。以聚半乳糖醛酸酶和内葡聚糖酶2种胞外酶为指示蛋白进行定量测定的结果表明,在突变株上清液中和菌体细胞内都没有这2种胞外酶的存在。以突变株PM2644为受体菌,通过基因功能互补的方法,从野生型青枯菌基因文库筛选到2个阳性克隆pPSP1和pPSP2,它们既能恢复2个突变株产生胞外蛋白的能力,也能将2个突变株的致病力恢复到接近野生型菌株的水平。     

植物青枯菌相关基因的克隆及致病力测定分析

以PM2644为受菌体，通过基因功能互补的方法，将从野生青枯菌基因文库中筛选得到的克隆进一步克隆得到克隆pLTK15。胞外酶活性测定结果表明，pLTK15与突变株PM2644接合产生的接合子能完全恢复突变株PM2644聚半乳糖醛酸酶的活性，接合子上清液SDS－PAGE电泳结果表明，接合子只能互补PM2644缺失的62．5kDa的一种胞外蛋白，经致病力测定，pLTDK15能使突变株PM2644的致病力得到部分恢复。结果表明，聚半乳糖醛酸酶和62．5kDa的胞外蛋白在青枯菌的致病过程中起着一定的作用。     

植物青枯假单胞菌胞外蛋白及其在致病中的作用

 利用Fny-CMV株系RNA3全长cDNA克隆.构建了MP基因全长的、缺失AUG、5'端缺失(111nt)、3'端缺失(124nt)及内部缺失KpnI片段(501nt)5种不同形式的植物表达载体pBMPR、pBMPA、pBMPS、pBMPH和pBMPK。上述植物表达载体在土壤农杆菌LBA4404介导下转化烟草生产品种NC89,获得了所有5种表达载体的转基因植株,并对其分别进行了分子检测和抗病性分析。     

产抗菌蛋白芽孢杆菌的筛选及抗菌蛋白性质

对小麦赤霉病菌（ＪＦ－１２）有拮抗作用的７６个芽孢杆菌菌株中有３０个能产生抗菌物质。根据无细胞培养滤液对氯仿和热处理的稳定性将３０个菌株分成三类。属于类型Ｉ的１４个菌株中，Ｂ３、Ａｎｔ－２７和Ａｎｔ－６４的抗菌物质可以被８０％饱和度硫酸铵沉淀，不能通过透析膜。Ｂ３的粗提抗菌蛋白对胰蛋白酶、蛋白酶Ｋ和ＲＮＡ酶均不敏感；在ｐＨ５．０￣１０．０范围内，抑菌活性与对照无显著差别；热处理（６０℃／３０ｍｉｎ     

植物青枯细菌胞外蛋白在致病中作用的研究

 用含有转座子Tn5的铜绿假单胞杆菌PAO1826(pMO75::Tn5,Kmr)诱变我国马铃薯青枯菌小种3号菌株PO41,获得胞外多糖正常产生的接合子6000多个,经SDS-PAGE电泳筛选出胞外蛋白减少1～9种的菌株21株。经测试其中20株为原养型菌株,1株为营养缺陷型菌株。这21株突变株在烟草叶片上呈现典型的过敏性反应。用茎部毛细管滴注法在马铃薯植株上进行致病力测试的结果表明,胞外蛋白发生减少的21株突变株中有20株致病力均不同程度下降,通过分析突变株胞外蛋白缺失种类与致病力强弱的关系,初步确定59.5ku、55ku和47ku的胞外蛋白在青枯菌致病过程中起着十分重要的作用。