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试验旨在构建鸡Prnp基因原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,为制备鸡朊蛋白单克隆抗体提供材料。根据GenBank已报道的鸡Prnp基因组序列和pET-28a质粒多克隆位点设计引物,以健康的鸡全血基因组DNA为材料,采用PCR的方法扩增鸡的Prnp基因,将目的基因片段与pET-28a载体连接,构建重组原核表达载体。重组菌转化到E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达的重组蛋白。结果表明,重组蛋白在诱导剂的终浓度为0.08 mmol·L-1,16 ℃,220 r·min-1诱导7 h,蛋白表达量最高。综上所述,本研究成功构建了pET-28a-ChPrnp重组表达菌株,为Prnp朊蛋白的结构、生理功能和致病机制研究提供方法。 相似文献
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段江振是登封市送表乡刘楼村的老蜂农。方园十里八乡的蜂友都称他为段师傅。段师傅的蜂群养得好 ,名不虚传 ,仅就他的养蜂点滴挂一漏万地叙述于后。段师傅爱蜂胜似爱子 ,他每次干农活回到家里 ,先到蜂场里看一看 ,而后再去吃饭 ,即是吃饭也要坐在蜂场里吃。农闲时期 ,他与蜂场形影不离 ,上午东边儿有凉荫 ,他就坐在东边儿看 ;下午西边儿有凉荫 ,他就坐在西边儿看 ,他说这是为了发现问题 ,解决问题。功夫不负有心人 ,这是他能养好蜂的重要一环。段师傅不管走到哪里 ,总是见花儿亲 ,不论是什么样的花儿 ,看见了总要顺手摘下一朵用鼻子闻一闻 ,… 相似文献
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