ANXA2真核表达载体的构建

以膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)真核表达载体的构建过程为基础,介绍一种易于成功构建真核表达载体的方法。以Hela细胞来源的cDNA为模板,半套式PCR为基础,通过两次PCR的方法,可获得5’端添加Kozak序列并融合表达HA标签基因和ANXA2的基因片段Kozak-HA-ANXA2,回收后克隆到pMD-18T克隆载体,获得合适的酶切位点,再采用双粘端连接法将其克隆入慢病毒真核表达载体pTRIP中。结果显示,经双酶切和测序之后确定真核重组载体pTRIP-HA-humANXA2构建成功。通过半套式PCR方法构建真核表达载体成功率高,为下一步细胞表达试验创造条件。     

DNA池快速筛查奶牛TLR_2基因多态性及等位基因频率估算

为了探讨Toll样受体2基因多态性,本试验选取中国荷斯坦牛为试验对象构建DNA池,并结合直接测序法对TLR_2基因编码区进行多态性筛查。结果显示,快速筛查到6个核苷酸位点,分别为T~(602)A、G~(10900)C、G~(11047)C、A~(11076)T、C~(12077)T、T~(10634)G,其中T~(10634)G为错义突变,氨基酸由原来的谷氨酸(Gly)转变为天冬氨酸(Asp),SNPs突变前后等位基因频率有明显差异。研究结果可为中国荷斯坦牛的分子遗传育种提供理论依据。