致病疫霉诱导的马铃薯酵母双杂交文库构建及无毒蛋白PiAVR3b寄主靶标筛选

致病疫霉是引起番茄、马铃薯晚疫病的植物病原卵菌,其分泌的效应蛋白在抑制寄主免疫方面发挥重要功能。鉴定效应蛋白的寄主靶标对研究植物与病原菌互作具有重要意义。本研究构建了高效马铃薯酵母双杂交cDNA文库,并通过筛选致病疫霉无毒蛋白PiAVR3b的互作蛋白来评价构建文库质量。分别提取接种致病疫霉后24 h和48 h的马铃薯栽培种‘合作88’叶片RNA,等量混合后构建cDNA文库。次级文库容量为1.6×10~7 cfu/mL,重组率为100%,插入片段平均在1 000 bp以上。以PiAVR3b为诱饵,通过酵母双杂交筛选初步获得10个候选靶标蛋白。经点对点验证,进一步确定了4个与PiAVR3b互作的靶标蛋白,分别是马铃薯MYB-like蛋白、线粒体外膜孔蛋白、碳分解代谢抑制蛋白、肽基脯氨酰异构酶。本研究构建的酵母双杂交文库为致病疫霉效应蛋白靶标筛选及植物与病原菌互作研究奠定了基础。     

狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒的构建

将携带狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因的穿梭栽体pShuttle-G和pShuttle-dG分别经PmeⅠ线性化后电转化含E1和E3区缺失的人5型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态菌株BJ5183-AD-1进行细菌内同源重组,经抗性筛选,PcR、PacⅠ酶切及测序鉴定.构建了狂犬病毒糖蛋白单、双拷贝基因重组腺病毒质粒pAdHu5-G和pAdHu5-dG,线性化后分别转染Ad-293细胞进行病毒包装.结果显示,在第4天发生细胞病变效应,且荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达;western-blot证实2株重组腺病毒表达的糖蛋白能被特异性单抗识别;遗传稳定性分析显示,病毒传至10代时单G和双G基因均稳定遗传,没有发生缺失和突变.为比较分析2株重组腺病毒糖蛋白的表达时效及免疫效果奠定了基础.     

晚疫病抗性相关基因NbMybl的克隆与功能分析

Myb转录因子广泛参与调控植物生长发育以及应对环境胁迫,但有关其对晚疫病抗性调控机制的研究较少。本研究从本氏烟草中克隆获得一个含Myb-like结构域的蛋白编码基因,命名为NbMybl。该基因开放阅读框全长为753 bp,编码250 aa。实时荧光定量PCR(qPCR)结果显示NbMybl受致病疫霉(Phytophthora infestans)侵染诱导表达。亚细胞定位表明NbMybl定位在植物细胞核和细胞质中。利用病毒诱导的基因沉默技术,发现沉默NbMybl能够明显降低本氏烟草对致病疫霉的抗性。分析比较NbMybl沉默和非沉默对照烟草株系应对P.infestans侵染的转录组数据,发现差异表达基因(Differentially expressed genes, DEGs)8486个,其中上调基因4202个,下调基因4284个。使用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库进行基因富集分析,发现鉴定得到的DEGs中共有373个参与植物-病原菌互作,308个参与植物激素信号转导,216个参与植物MAPK信号途径。推测这些DEGs可能与...     

温度与柑桔大实蝇羽化关系研究

柑桔大实蝇Bactrocera minax为一化性昆虫,温度是影响大实蝇蛹羽化的关键因素。本实验研究了化蛹后不同温度处理对大实蝇蛹羽化的影响,结果显示,10月29日化蛹并置于25℃条件下的蛹能够羽化,蛹历期为113.7 d。化蛹30 d后再移入25℃恒温培养室的蛹历期为122.6 d,自然条件放置3个月后移入25℃恒温培养室的蛹历期为179.7 d。自然条件放置5个月后再移入25℃恒温培养室的蛹和一直处于自然条件的蛹历期为200 d。自然条件下的蛹羽化率和羽化整齐度都相对较高,蛹历期越短羽化率、羽化整齐度越低。     

高能电子束对橘小实蝇的辐照效应研究

橘小实蝇是一种毁灭性果蔬害虫,本文研究了高能电子束对香蕉中橘小实蝇的致死效果,探索其用于防治和口岸检疫诊断的可行性。通过AB5.0~20x型电子直线加速器对香蕉中橘小实蝇的卵和幼虫、沙土中蛹辐照,辐照剂量为0、500、1000、1500、2000、3000Gy,结果显示高能电子束辐照对橘小实蝇卵、幼虫、蛹的LD50分别为879.8、2839.1、868.5Gy,表明幼虫对高能电子束的耐受能力较强。3000Gy能有效抑制卵的孵化(孵化率1.05%)、蛹的羽化(羽化率0),而幼虫致死率仅62.22%。高能电子束辐照效应还有待进一步研究优化。     

论规模化猪场的标准化管理和技术创新

随着养猪产业结构调整的不断深入,农村家家户户全民养猪的生产模式,已经基本从养猪行业退出。可以预期,与发达国家的情况类似,未来养猪产业最具竞争活力的生产模式,将是以家庭为生产单位的小型养猪专业户和以财团为背景的大型规模化养猪集团。现行中小型规模化猪场或养猪集团未来可能的出路,只有3条:1)通过自身的积累和滚动发展,不断做大和做强;2)通过对猪场的重新规划和对栏舍设备的技术改造,并实行规范化管理,使猪场本身具有收购价值,等待大型养     

利用酵母双杂交筛选与致病疫霉菌效应蛋白PITG_07586互作的寄主蛋白

 致病疫霉是引起马铃薯晚疫病的病原菌,其分泌的效应蛋白是侵染寄主的重要毒力因子。本研究在致病疫霉转录组中筛选到一个侵染早期表达的效应蛋白基因PITG_07586(GenBank:XM_002904522.1)。该基因全长447 bp,其编码蛋白包含1个信号肽,1个核定位信号序列(RRRRKRRKKKK)。在本氏烟草中,瞬时表达该基因显著促进病原菌侵染。亚细胞定位表明GFP-PITG_07586定位在细胞核中。利用酵母双杂交技术并以PITG_07586为诱饵筛选马铃薯cDNA文库,最终获得3个靶标蛋白。经序列比对分析,这3个靶标蛋白分别是马铃薯POM30蛋白、电压依赖阴离子通道蛋白VDAC以及SRC2类蛋白。研究结果为致病疫霉菌效应蛋白PITG_07586及其靶标蛋白如何调控植物免疫提供重要依据。