基因枪法转化小麦幼胚瞬时表达

自Vasil et al．（1996）利用基因枪将获得小麦对除草剂Basta具有抗性的再生植株以来，基因枪介导的小麦遗传转化研究发展很快（Altpeter et al．，1996）。在小麦基因枪转化中，优化基因枪转化因素，提高转化效率仍然是基因转化的关键问题。本实验研究了不同金粉用量、质粒DNA浓度及轰击枪数对小麦幼胚瞬时表达的影响，通过GUS染色和细胞压片，分析了gus基因的瞬间表达。     

基因枪转化小麦愈伤组织的影响因素研究

以小麦愈伤组织为受体材料,用基因枪法将报告基因GUS和目的基因Psag12-IPT导入小麦中。GUS基因表达检测表明,金粉用量越高,转化频率越高;质粒DNA用量以2.0μg/枪最佳;随着愈伤组织培养时间的延长,GUS基因瞬时表达呈明显下降趋势,至第28天以后趋于稳定。另外,GUS基因瞬时表达检测应在24h内进行。     

小麦幼胚基因枪转化的影响因素研究

为了明确不同因素对小麦基因枪法转化效率的影响。用PDS-1000／He型基因棺将抑制叶片衰老基因Psag12-ipt转入小麦幼胚细胞，通过对报告基因GUS瞬时表达的检测，研究了金粉用量、质粒DNA用量及轰击次数对转化率的影响。结果表明，金粉用量在100-400μg范围内，时幼胚瞬时表达率影响不大，幼胚瞬时表达率在73．7%～85．0％之间，但随金粉用量的增加，细胞瞬时表迭率明显提高；质粒DNA用量以每枪2．0μg为最佳；轰击2枪幼胚和细胞瞬时表达率明显高于轰击1枪。     

普通小麦基因转化中良好受体系统的建立

对影响小麦幼胚愈伤组织高频率再分化的条件进行了研究。结果表明,暗培养条件下诱导的小麦幼胚愈伤组织的再分化频率显著高于散光和2000lx光照条件;大田生长的小麦比温室盆栽小麦的幼胚脱分化和再分化频率高。小麦主茎穗部的幼胚组织脱分化和再分化特性显著高于小麦分蘖茎穗部的幼胚组织。不同年份、不同基因型小麦品种,及不同胚龄幼胚组织的脱分化和再分化特性有一定差异。通过诸多因素的优化和最适幼胚组织的选择,可建立小麦基因转化中不依赖于基因型的良好受体系统。