转基因玉米NK603基体标准物质研制

由于转基因标准物质的缺乏,无法保证检测结果的准确、可靠和可比。本研究将筛选后的转基因玉米(Zea mays)NK603 阳性材料及受体进行研磨筛分,粒径测定结果表明,研磨后的粒径大小为 100 μm左右。采用重量法配置了 3 个不同水平的转基因玉米基体物质,应用实时荧光定量 PCR 方法对研制的标准物质进行均匀性和稳定性检测,统计结果表明,所研制的基体标准物质均匀性良好;在 4 ℃保存条件下,一年内未发现不稳定现象。重量法确定的标准值和扩展不确定度(k=2)分别为(0.50±0.10)%、(1.00±0.35)%和(5.00±0.35)%。同时选择 7 家实验室进行协同验证,结果表明,研制的转基因玉米 NK603 基体标准物质量值准确可靠,与国外标准物质相比,不确定度水平相当。本实验研制的转基因玉米 NK603 基体标准物质适用于转基因玉米 NK603 的定量检测。     

水稻淀粉分支酶基因(RBE4)作为转基因水稻基体标准物质的内标准基因的研究

内标准基因(endogenous reference gene)是指具有物种专一性、不显示等位基因变化、拷贝数恒定的保守DNA序列,对基因定量分析时具有重要意义.本研究选取了5个水稻内标准基因:根部表达的水稻基因(rice root-specific,GOS9)、磷脂酶D基因(phospholipase D,PLD)、蔗糖磷酸合成酶基因(sucrose phosphate synthase,SPS)、水稻淀粉分支酶基因(rice starch branching enzyme,RBE4)、泛素蛋白基因(ubiquitin 5,UBQ5)和2个外源基因:苏云金芽孢杆菌CrylAb杀虫晶体蛋白基因CrylAb和cryl Ab/cryl Ac融合杀虫晶体蛋白基因(CrylA c/CrylAb),分别以转基因水稻(Oryza sativa L.)克螟稻2号和TT51-1为模板,比较各自的外源基因(CrylAb =KMD2和CrylA c/CrylA b=TT51-1)与5个内源基因的PCR产物量,筛选出和外源基因PCR产物量最接近的内标准基因为RBE4.在此基础上,数字PCR不依赖于已知浓度的标准曲线来定值,可以避免标准样品的标准曲线和样品目的基因的扩增曲线在扩增效率上的不一致等因素所带来的误差,定值结果更加准确、可靠,采用数字PCR分析外源基因拷贝数与内标准基因RBE4拷贝数的比值,荧光定量PCR方法分析内标准基因RBE4和外源基因的定量检测稳定性、灵敏度等.结果表明,外源基因拷贝数与内标准基因RBE4拷贝数的比值在转基因水稻克螟稻2号和TT51-1上都较接近于1∶1,分别为115.9％和105.3％.RBE4的荧光定量PCR体系重复性、定量检测稳定性和灵敏度好,符合作为转基因水稻基体标准物质定量分析的内标准基因的要求,RBE4定量体系在TT51-1和克螟稻2号的最小检出限(LOD)分别为5～11 copies/μL和3～12 copies/μL,最小定量限(LOQ)分别为11～22和12～24 copies/μL.RBE4是转基因水稻标准物质研制和产品定量检测的适宜内标准基因.研究结果为转基因作物标准物质研制和定量检测的内标准基因选取提供一定的参考.     

高效液相色谱法测定西柚不同组织中的10种柑橘黄酮类化合物

该文建立了圣草次苷、柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香风草苷、枸橘苷、甜橙黄酮、川皮苷和蜜橘黄酮等10种柑橘黄酮类化合物同时测定的高效液相色谱方法。色谱柱为Welch Ultimate XB-C18(5μm,4.6×150mm),采用甲醇-水(含0.1%甲酸)流动相体系,梯度洗脱,检测波长为280nm。方法学考察结果表明,对10种柑橘黄酮类化合物,提取效率均大于95%;在给定的范围内线性关系良好,相关系数r2均大于0.99;方法的精密度和重现性良好,相对标准偏差(RSD)分别小于5.4%和7.1%。该方法用于西柚不同组织中柑橘黄酮类化合物含量的测定,结果显示,柑橘黄酮类化合物在西柚果皮、囊衣和果瓣中的含量和分布差异显著。     

离子色谱-电导检测法测定豆奶粉中的亚硝酸盐和硝酸盐含量

该文建立了豆奶粉中亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定方法。豆奶粉样品经乙酸低温沉淀和固相萃取净化,采用离子色谱-电导检测分析,并考察了线性、检出限、准确性、精密度和加标回收率等。结果表明,亚硝酸盐(以NO2-计)和硝酸盐(以NO3-计)分别在0.01~0.20μg/m L和0.10~2.00μg/m L的范围内线性良好,相关系数(r)均大于0.99,在豆奶粉中的检出限分别为0.04/0.016mg/kg(NO2-/NO3-);加标回收率分别为94.3%/97.1%(NO2-/NO3-);方法的准确性分别为91.0%/96.5%(NO2-/NO3-),精密度分别为2.7%/1.4%(NO2-/NO3-)。对市售4种豆奶粉样品进行筛查,亚硝酸盐和硝酸盐的含量均小于国家限量标准。本方法简便快速、灵敏度高、准确性、重复性好,可用于豆奶粉质量控制中亚硝酸盐和硝酸盐含量的测定。     

高效液相色谱法测定竹叶提取物中的14种酚酸类化合物

该研究建立了原儿茶酸、龙胆酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸、荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷等14种酚酸类化合物同时测定的高效液相色谱方法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(5μm,4.6×250mm),采用甲醇-水(含0.1%甲酸)流动相体系,梯度洗脱,检测波长为274nm和324nm。结果显示,14种酚酸类化合物在0.250~50.0μg/m L的范围内线性关系良好,相关系数r2均大于0.99;方法精密度良好,相对标准偏差(RSD)小于7.7%。表明该方法可用于竹叶提取物中酚酸类化合物含量的测定。     

转基因水稻种子核酸提取方法的比较研究

以转基因水稻克螟稻2号及其受体水稻秀水11的种子为试验材料,将水稻种子脱壳磨成粉末后,称取100mg粉末分别用传统CTAB法和5种核酸提取试剂盒进行水稻基因组DNA的提取,其中试剂盒A和试剂盒B为磁珠法,其余为硅胶过柱法,将提取的基因组DNA通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、荧光定量PCR等3种检测方法比较其提取效果...