基质固相分散-离子色谱法测定卷烟样品中的糖和多元醇

[目的]研究用基质固相分散法提取净化,离子色谱法测定卷烟中的糖和多元醇。[方法]将样品与石墨化碳黑球（w／w,1：4）充分研磨后装柱,用热水洗脱,洗脱液中的糖用离子色谱测定。以CarboPacMAl（4×250mm,5μm）阴离子交换柱为固定相,0．5mol／LNaOH溶液为流动相分离,脉冲安培检测器检测。[结果]一次进样可实现卷烟样品中甘油、丙二醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖和半乳糖9种成分的同时测定。方法加标回收率在94．6％～105．7％,相对标准偏差小于3．0％,检测限均小于50μg/L.[结论]该方法重现性好,准确可靠,回收率较好,可用于实际烟草样品中糖和多元醇的测定。     

FTIR技术在烟草基因编辑素材病害初级筛选中的应用

针对基因编辑素材出现的病害,以差异性分析为基础,围绕素材病害特征为研究核心,开发出了高通量的FTIR初级筛选方法。 通过对早花成苗期与正常成苗期烟叶研究,表明早花后烟叶糖类化合物明显增加,而蛋白质含量变化不明显,糖/蛋白质比值明显增加,糖类化合物可能是早花烟草植株的成花信号因子。黄化烟叶与正常烟叶的研究表明,黄化烟叶糖类化合物明显减少,而蛋白质含量基本不变,同时黄化烟叶中出现硝酸盐的富集,这可能是由于在黄化烟叶中,光合作用的降低,使得植物硝酸盐的吸收和同化都降低,但是同化作用降低更明显,因此,出现硝酸盐的富集。也有可能是由于编辑基因位点,阻断或降低了植物硝酸盐的同化作用。烟叶中硝酸盐的富集可以作为该类型黄化病初步筛选标准,1384 cm-1和829 cm-1为其烟叶黄化标志特征峰。此外,通过行业标准测试方法对上述化学成分变化进行了验证且分析结果一致。 主成分分析研究表明,可以明显的将上述病害烟叶与对照烟叶进行区分,并建立了相关病害的初步判定模型。 研究结果说明FTIR技术的分析结果具有较高的准确度,且不同样品间区别明显,可以用于基因编辑素材的早期病害诊断和病害分析等的高通量初级筛选。     

匀浆法提取-高效液相色谱法测定烟草料液中苯甲酸·山梨酸

[目的]研究了匀浆法提取-高效液相色谱法测定烟草料液中的苯甲酸和山梨酸。[方法]用匀浆法提取料浸样品,然后采用WatersOasis（HLB固相萃取小柱预分离。以Waters-XbridgeShieldRP18（3.9×150mm,5μm）色谱柱为固定相,0.2%磷酸和乙睛为流动相,流速1.2ml/min。苯甲酸和山梨酸在10min内可达到基线分离,并采用紫外二极管矩阵检测器检测。[结果]方法标准回收率为92%～104%,相对标准偏差为2.8%～3.2%,结果满意。[结论]该研究方法重现性好,回收率较高,检出限较低,可用于烟草料液中苯甲酸和山梨酸含量分析的推广。     

莲藕多酚氧化酶互作蛋白的筛选及验证

【目的】以中国莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的多酚氧化酶家族成员之一NnPPO1（GenBank: ADC92563.1）为研究对象,筛选、验证与其互作的蛋白,为深入研究莲藕PPO的分子作用机制、精准抑制其活性奠定基础。【方法】利用酵母双杂交（Y2H）技术,验证莲藕抗氧化酶是否与NnPPO1存在互作关系。通过转化酵母试验检测互作蛋白过氧化氢酶同工酶NnCAT1（GenBank:XP_010242894.1）的毒性和自激活活性。构建双分子荧光标记试验（BiFC）所用的35S-NnPPO1-SPYNER173、35S-NnCAT1-SPYCEM表达载体,通过农杆菌介导法,将重组质粒转化烟草,进一步验证NnPPO1与NnCAT1之间的互作关系。根据NnPPO1和NnCAT1的结构域截短蛋白,寻找互作关键结构域。利用PlantCARE分析NnPPO1与NnCAT1启动子相关作用元件,利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析NnPPO1与NnCAT1在莲藕不同组织中的表达水平。采用同源重组的方法构建35S-NnCAT1-GFP融合蛋白表达载体,用于亚细胞定位分析。运用DNAMAN软件对NnCAT1序列和其他物种序列进行多序列比对。运用生物信息学网站对NnCAT1进行理化性质与结构分析。【结果】NnCAT1与NnPPO1存在蛋白互作,且NnCAT1蛋白无自激活作用,对酵母菌株也没有毒性。在细胞膜和细胞核上观察到黄色荧光信号,进一步证实NnPPO1与NnCAT1之间存在互作。NnPPO1的酪氨酸酶结构域在蛋白互作中发挥主要作用。NnPPO1与NnCAT1启动子序列上存在多种顺式调控元件,如光响应元件Box 4、GT1-motif、TCT-motif,逆境响应元件ARE以及激素响应元件CGTCA-motif、TGACG-motif等。NnPPO1与NnCAT1的表达模式基本相同,在各组织中均有表达,均在叶中表达量最高,在茎尖中表达量最低。亚细胞定位结果显示NnCAT1定位于细胞膜和细胞核中。莲藕NnCAT1的相对分子质量约为57.0 kD,理论等电点（PI）为6.93;该蛋白为同源四聚体亲水性蛋白质;无跨膜结构和信号肽,存在叶绿体转运肽,前21 aa为转运肽区域;二级结构由27.64%的α-螺旋、15.65%延长链、6.30%β-转角和50.41%无规则卷曲构成。【结论】筛选出NnCAT1与NnPPO1之间存在蛋白互作,用BiFC进一步证实两者互作的真实性,NnPPO1保守的酪氨酸酶结构域在互作中发挥主要作用;NnPPO1与NnCAT1的表达模式基本相同,推测NnPPO1与NnCAT1协同互作导致莲藕等果蔬褐变。     

白肋烟自然凉制过程中叶片电导率的变化规律

研究了白肋烟KY171和TR Model自然凉制过程中电导率、水分活性、叶片重量的变化规律。结果表明 :2个品种变化规律相同。电导率在采收后的 0～ 2 1d逐渐升高 ;2 1d达到最高值 ,其后趋于平稳KY171的叶片水分电导率在各阶段都高于TR Model。水分活性在采收后的 0～ 7d变化不大 ;采收后的 7～ 2 1d ,KY171和TR Model中脉水分活性下降较小 ,而叶片水分活性有显著降低 ;采收后 2 1～ 3 5d ,二者的中脉水分活性逐渐下降。叶片重量在采收后 0～ 2 1d呈现逐渐下降趋势 ,随后趋于平稳。     

原子荧光法测定烟草样品中砷和汞的方法研究

研究了用原子荧光法测定烟草中砷和汞的方法。烟草样品用硝酸-高氯酸消化,然后用原子荧光法测定,方法检出限为砷0.05 ng/mL、汞0.008 ng/mL,相对标准偏差为砷2.6%、汞2.7%。样品加标回收率为砷96%~103%、汞94%~102%,结果令人满意。