微生物学技术在食品专业综合实验教学中的应用与实践——以“猪源大肠杆菌耐药性调查研究”为例

针对食品质量与安全专业综合实验既要有基础性试验、设计性实验和综合性试验相结合,又要有效涵盖学科方向的典型实验操作与实验设计分析这一目标,设计了课题"猪源大肠杆菌耐药性调查研究",将食品微生物学检验国标方法、分子生物学方法和美国临床和实验标准协会(CLSI,2012)推荐的药敏试验法应用到食品质量与安全专业综合实验教学项目中,调研了浙江省某地区农贸市场和超市生鲜猪肉样本中大肠杆菌耐药情况。食品质量与安全专业本科生通过此项专业综合实验训练,熟练掌握了微生物学相关技术,有利于培养学生试验设计能力、数据分析能力和写作能力,可为食品专业相关实验教学改革提供参考与借鉴。     

浅谈牛蒡的开发和利用

牛蒡是多年生草本药食两用蔬菜,具有良好的药用和食用价值。目前牛蒡加工的水平还停留在初级阶段,市场上牛蒡产品主要是保鲜牛蒡、牛蒡腌渍制品等。因此,了解牛蒡的特性,对牛蒡进行精深加工和功能因子的开发将有良好的前景和广阔的市场。     

双重RT-RPA法快速检测沙门氏菌及其1类整合酶基因

以重组酶聚合酶扩增法(recombinase polymerase amplification, RPA)为技术基础,建立了一种能单管同时快速鉴定沙门氏菌及其耐药相关1类整合酶基因的双重荧光定量重组酶聚合酶扩增(duplex real-time recombinase polymerase amplification, RT-RPA)方法。该方法以沙门氏菌特异毒力基因fimY和细菌耐药相关1类整合酶基因intI1为靶标序列,设计特异性RPA引物与exo探针,建立双重RT-RPA方法。结果显示,在fimY引物终浓度320 nmol·L^-1,intI1 引物终浓度400 nmol·L^-1,fimY探针终浓度60 nmol·L^-1,intI1探针终浓度100 nmol·L^-1,反应温度37 ℃,反应20 min时,双重RT-RPA扩增效率最高,且特异性好。灵敏度试验显示,沙门氏菌检测灵敏度为1.29×10¹ CFU·mL^-1,intI1检测灵敏度为1.60×10¹ CFU·mL^-1。实际样品检测试验中,前期从生猪养殖场、屠宰场、超市和农贸市场筛选到61株沙门氏菌(2株携带intI1基因)、555株大肠埃希菌(均携带intI1基因),用建立的双重RT-RPA方法对上述菌株进行检测,可以同时鉴定出沙门氏菌及intI1基因。该方法与传统培养方法和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)法相比,具有特异性强、灵敏度高、速度快(检测时间20 min)等优点,为快速鉴定携带耐药相关整合酶基因intI1的沙门氏菌提供了准确有效的方法,可为耐药有害微生物的快速鉴定奠定基础。