抗猫杯状病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

为了制备抗猫杯状病毒的单克隆抗体,并对其基本生物学特性进行鉴定。分别采用饱和硫酸铵方法、差速离心、氯化铯密度梯度离心方法对猫杯状病毒(FCV)进行纯化,将纯化的猫杯状病毒作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立抗猫杯状病毒单克隆抗体的杂交瘤系,鉴定单克隆抗体的亚型。结果表明：本实验获得了2株稳定分泌特异性抗猫杯状病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D8、E5,其亚型均为IgM。获得的单克隆抗体与犬细小病毒(CPV)、猫细小病毒(FPV)、犬瘟热病毒(CDV)均无交叉反应。成功制备了抗猫杯状病毒单克隆抗体,为建立相关诊断方法奠定了基础。     

NIH稀毛小鼠繁殖性能及部分器官组织学研究

将5对2月龄NIH稀毛小鼠合笼,同时将5对2月龄正常小鼠合笼。记录窝产仔数与仔鼠离乳期存活率。使用统计学方法对1月龄与2月龄NIH稀毛小鼠与正常小鼠(雄性5只,雌性5只)的心、肝、脾、肺、肾的脏器系数进行分析。取1月龄的NIH稀毛小鼠与正常小鼠心、肝、肺、肾、背部皮肤石蜡切片后光镜观察,取1周龄与2周龄的NIH稀毛小鼠与正常小鼠的背部皮肤进行电镜扫描观察。研究发现NIH稀毛小鼠幼鼠的窝产仔数与仔鼠离乳期存活率均低于NIH正常小鼠,部分脏器系数差异显著(P0.05),心、肝、肺、肾组织学并未发现明显差异。NIH稀毛小鼠的背部皮肤表现为皮下组织及真皮层内毛囊数量较少且毛囊出现角化现象,未见观察到明显的毛干结构。     

猫多能性基因慢病毒表达载体的构建与鉴定

从含有猫Oct4、Sox2、Klf4及c-Myc的质粒中获取目的基因,将目的基因与携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体LV5进行定向连接,构建慢病毒表达载体LV-Oct4、LV-Sox2、LV-Klf4、LV-c-Myc,将其连接产物分别转化至细菌感受态细胞中,经筛选阳性克隆、酶切鉴定后测序,通过lipofectamine2000介导转染293T细胞对慢病毒进行包装并测定病毒滴度,探讨猫多能性基因Oct4、Sox2、Klf4及c-Myc慢病毒载体的构建与包装。结果表明:经双酶切鉴定及测序分析,成功构建并包装出LV-Oct4、LV-Sox2、LV-Klf4及LV-c-Myc慢病毒载体,基因测序结果与目标序列完全一致,且病毒滴度均达到107 TU·mL-1以上。说明成功地构建了猫多能性基因慢病毒表达载体,获得稳定产生慢病毒颗粒的包装细胞株。