濒危药用植物青天葵器官大小调控基因EBP1的克隆与分析

表皮生长因子受体3结合蛋白(ErbB3 binding protein, EBP1)是植物器官大小生长的关键调控因子。本研究应用RACE-PCR技术从濒危药用植物青天葵(Nevilia fordii (Hance) Schltr.)中克隆获得EBP1编码基因并命名为NfEBP1。该基因全长为1188 bp (Genbank登记号JN854245),编码395个氨基酸。生物信息学分析表明,NfEBP1蛋白分子量为43.4 kD,等电点为6.12,整体表现为亲水性。NfEBP1不含信号肽、叶绿体转运肽或线粒体靶向肽,整体位于细胞膜外;其二级结构由21个α-螺旋、21个延伸链、18个β-转角和28个随意卷曲构成。 NfEBP1含有PA2G4细胞增殖功能域,与其他植物EBP1有着高度的同源性,均归属APP_MetAP超级家族。 NfEBP1在青天葵不同组织均有表达,相对表达量以叶片最高,球茎次之,叶柄则最低。本研究成功克隆青天葵EBP1基因并分析其在青天葵不同组织的表达水平,为下一步利用该基因促进青天葵器官生长研究提供了基础数据。     

岭南道地药材青天葵的组织培养与植株再生

以青天葵新鲜球茎为试材,对离体条件下青天葵的愈伤组织诱导及其植株再生进行研究。结果表明:0.1%升汞溶液处理青天葵球茎10min、玻璃培养皿有利于青天葵愈伤组织的诱导;青天葵走茎及愈伤组织在MS+1.0mg/L 6-BA培养基中培养可得到大量丛生芽及愈伤组织,多次继代培养可得到完整植株;将青天葵走茎接种于含有0.1%活性炭的MS培养基中可获得大量组培球茎。     

岗梅种苗质量分级标准研究

目的:研究岗梅种苗质量分级标准.方法:测量1年生岗梅种子实生苗的株高、株径、根长等参数,通过多种方法进行分级获得分级标准,以不同级别存活苗分布情况来评价3种质量分级方法.结果:确定以种苗参数K-聚类法进行质量分级,将岗梅种苗分为三级,其中一级种苗株高≥59 cm,根长≥22 cm,株径≥6.96 mm;二级种苗株高43～59 cm,根长18～22 cm,株径4.88～6.96 mm;三级种苗株高15.5～43 cm,根长10～18 cm,株径2.18～4.88 mm.结论:建立了适用于生产实践的岗梅种苗质量分级标准.     

药用植物青天葵的悬浮培养条件优化

以悬浮细胞干重增加率、酶活力为考察指标,研究不同培养基、光照条件、蔗糖浓度、培养基pH值对药用植物青天葵细胞生长的影响,对青天葵悬浮细胞培养方法进行条件优化。结果表明,1/4MS和1/2MS培养物外观形态最佳,1/2MS组培养物干重增加率最大,MDA含量最低,POD含量最高;暗培养条件有利于愈伤组织干重的增加;蔗糖浓度为1%时愈伤组织干重增加率显著高于其他处理组,pH6.0为青天葵悬浮培养的合适pH值,培养基中添加MES可明显提高干重增加率。     

青天葵叶片总RNA提取方法的比较研究

采用RNeasy Plant Mini Kit法、RNAiso Plus法、RNAiso for Polysaccharide-rich Plant Tissue法、CTAB法和SDS法,并结合4种抽提试剂组合,分别提取青天葵叶片总RNA.通过琼脂糖凝胶电泳、紫外检测及RT-PCR反应对提取效果进行了比较分析.结果表明:除RNAiso Plus法外,其它方法提取的总RNA均有一定程度的DNA污染.RNAiso Plus法组③(1/5体积KAC+4/5体积PCI)完整性最好,SDS法组④(1/5体积NaCl+ 4/5体积PCI)浓度最高,为372.4 ng/μL.5种方法共20个处理组获得的RNA反转录后均能扩增出18S rRNA基因片段.该研究建立起了适用于青天葵叶片的总RNA提取方法,为青天葵的基因克隆、表达及转录组分析奠定了技术基础.     

青天葵及其混伪品的rbcL基因序列鉴定研究

本研究旨在利用植物DNA条形候选片段rbcL基因的序列信息鉴别青天葵及其混伪品。采用试剂盒法提取青天葵及其混伪品的叶片总DNA,一对通用引物应用于PCR扩增和双向测序。采用DNAMAN、CLUSTALX和MEGA4.0等软件进行序列拼接比对、遗传距离分析和聚类分析。获得的青天葵及其混伪品rbcL基因序列长度为502 bp,3个类型的青天葵序列完全一致,它们与毛叶芋兰之间存在5处差异;青天葵种内K2P遗传距离小于其与混伪品的种间K2P遗传距离;NJ聚类树显示,各物种均表现出单系性,并与其它物种相互区别。表明rbcL基因可用于鉴别青天葵及其混伪品。