油菜内生阿氏芽孢杆菌鉴定及其对铬(Ⅲ)处理反应性分析

为探明耐铬(Ⅲ)油菜内生菌BNC-Q菌株对铬(Ⅲ)处理的生理生化反应性特点,以BNC-Q菌株为研究对象,进行了菌种鉴定以及铬(Ⅲ)处理反应性分析等试验.16S rDNA PCR分析结果表明,BNC-Q菌株为阿氏芽孢杆菌.铬(Ⅲ)胁迫培养试验结果表明,BNC-Q对铬(Ⅲ)耐受较强,可在5 mmol/L铬(Ⅲ)浓度条件下保持繁殖能力,可被不高于2 mmol/L的铬(Ⅲ)促进生长繁殖.蛋白质表达分析试验结果表明,经2 mmol/L铬(Ⅲ)处理后,BNC-Q可特异表达出一条约40 ku大小的蛋白质条带.抗氧化性分析试验结果表明,2 mmol/L铬(Ⅲ)处理对BNC-Q菌株清除DPPH自由基的能力基本无影响,但其对超氧阴离子自由基(O2-·)和羟基自由基(·OH)的清除率分别由63.7％,63.5％上升到91.1％,85.2％.综上所述,BNC-Q菌株为阿氏芽孢杆菌,对铬(Ⅲ)耐受性较强,可被铬(Ⅲ)诱导表达约40 ku的特异蛋白,铬(Ⅲ)诱导处理可显著提高其清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力.研究结果可为重金属铬的生物修复研究提供一定的基础.     

银杏类黄酮研究进展

类黄酮是植物体内最重要的次生代谢物之一,在植物的生长、发育、抗逆境胁迫等多种生物进程中发挥着重要的作用,同时对人类的健康也具有多种保健与药用功能。该文在参考近年来国内外与类黄酮和银杏类黄酮相关研究的基础上,对银杏类黄酮分类、植物体内类黄酮生物合成途径以及银杏类黄酮生物合成相关基因克隆等进行了归纳与分析,旨在为银杏类黄酮更广泛、更深入的研究提供新的思路。     

银杏类黄酮糖基转移酶基因片段克隆与分析

根据GenBank中其他植物的类黄酮糖基转移酶基因(UFGT)的保守区设计简并引物,采用RT-PCR技术从银杏中扩增出UFGT基因的部分保守序列,并利用3′-RACE PCR方法,得到了包括3′-末端在内的银杏UFGT基因片段,命名为GbUFGT-3。结果表明:该片段长度为1 064bp,其中3′-UTR长度为314bp、编码区长度为750bp,可编码249个氨基酸,该氨基酸序列具有完整的UFGT特征序列PSPG-box;BLASTp分析及系统进化树分析表明GbUFGT-3确为银杏UFGT基因的序列片段;半定量RT-PCR结果表明,GbUFGT-3是非诱导表达基因,在银杏叶片的整个发育期均有较高水平的表达,不同发育期表达量无差异。GbUFGT-3已被GenBank收录,登录序列号为JN640564.1。     

蚕蛹油乙酯的安全性评价

[目的]对蚕蛹油乙酯进行安全性评价.[方法]采用最大耐受量法进行急性经口毒性评价,并采用Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸变试验进行蚕蛹油乙酯的遗传毒性研究,并开展大鼠30 d喂养试验.[结果]蚕蛹油乙酯经急性经口毒性评价为实际无毒级物质;Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸变试验均未发现蚕蛹油乙酯有显著的遗传毒性;大鼠30 d喂养试验中,各试验组大鼠生长发育良好,无异常行为和中毒症状.[结论]蚕蛹油乙酯为实际无毒物,无遗传毒性,可长期服用.     

聚乙烯醇和海藻酸钠联合固定化汉逊德巴利酵母产3-羟基丙酸的研究

采用微胶囊固定化技术,利用聚乙烯醇、海藻酸钠和氯化钙制备汉逊德巴利酵母微胶囊,探讨了聚乙烯醇、海藻酸钠、氯化钙的浓度对汉逊德巴利酵母微胶囊的制备工艺及其产3-羟基丙酸量的影响。结果表明,随着聚乙烯醇、海藻酸钠和氯化钙浓度的分别增加,3-羟基丙酸含量先增加后减少。聚乙烯醇最佳浓度为10.0%,此时3-羟基丙酸含量为(20.01±0.66)g/L;海藻酸钠为最佳浓度为1.0%,此时3-羟基丙酸含量为(18.71±0.54)g/L;氯化钙最佳浓度为2.1%,此时3-羟基丙酸含量为(18.37±0.45)g/L。聚乙烯醇和海藻酸钠联合固定汉逊德巴利酵母制备微胶囊最佳工艺为10.0%聚乙烯醇,1.0%海藻酸钠和2.1%氯化钙,在此条件下3-羟基丙酸含量为(21.53±1.12)g/L。     

乙醛脱氢酶基因表达载体的构建及表达条件筛选

通过PCR扩增得到酿酒酵母乙醛脱氢酶基因ALDH长约1.6 kb的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,并将该序列与pET30a(+)载体相连,得到pET30a-ALDH重组质粒,使其在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达;对含有pET30a-ALDH重组质粒的工程菌进行表达条件分析,发现当异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度为1.0 mmol/L、诱导温度为28℃、诱导表达时间为6 h时,ALDH酶相对活性达到最高,为30.2 U/m L。     

银杏类黄酮O–甲基转移酶基因的克隆与表达分析

 采集扬州大学银杏种质资源圃不同发育时期的银杏叶片提取RNA,经简并引物PCR和5′ RACE扩增,得到了5′端包含起始密码子在内的长为876 bp的银杏类黄酮O–甲基转移酶（flavonoid O-methyl-transferase,FOMT）基因cDNA片段,命名为GbFOMT-13,其在GenBank数据库注册号为JN711433。对所得核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行BLAST比对分析和进化树分析,结果证实了GbFOMT-13为银杏的FOMT部分序列。半定量RT-PCR结果表明,GbFOMT-13表达水平在银杏叶片的不同发育时期差异很大,其表达模式表现为春季幼叶＞秋季老叶＞夏季成熟叶,与类黄酮总量增长速率变化趋势相似。     

银杏类黄酮糖基转移酶基因全长序列克隆及表达分析

 以银杏（Ginkgo biloba L.）雄株叶片为试材,采用同源基因克隆及RACE-PCR方法,克隆到了类黄酮糖基转移酶（UDP-glycose：flavonoid glycosyltransferase,UFGT）基因GbUFGT的全长cDNA序列,其在GenBank中的注册号为JN640564.2。该基因编码区长1 491 bp,编码496个氨基酸。GbUFGT蛋白具有保守的PSPG基序、UDP–葡萄糖基转移酶和UDP–葡萄糖醛酸基转移酶结构域,与其他植物中的UFGT蛋白同源性较高。GbUFGT基因组序列与其cDNA序列相同,无内含子。半定量RT-PCR结果表明,GbUFGT在整个银杏叶片发育期均可较高水平的表达,且不同发育期表达水平无明显变化,属非发育时期特异性基因。