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试验旨在构建鸡Prnp基因原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,为制备鸡朊蛋白单克隆抗体提供材料。根据GenBank已报道的鸡Prnp基因组序列和pET-28a质粒多克隆位点设计引物,以健康的鸡全血基因组DNA为材料,采用PCR的方法扩增鸡的Prnp基因,将目的基因片段与pET-28a载体连接,构建重组原核表达载体。重组菌转化到E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达的重组蛋白。结果表明,重组蛋白在诱导剂的终浓度为0.08 mmol·L-1,16 ℃,220 r·min-1诱导7 h,蛋白表达量最高。综上所述,本研究成功构建了pET-28a-ChPrnp重组表达菌株,为Prnp朊蛋白的结构、生理功能和致病机制研究提供方法。 相似文献
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风景园林学科是保持和创造人及其活动与自然世界和谐关系的艺术和科学,国际化应用型专业硕士培养显得尤为重要。文章从就业前景、专业硕士实践需求、职业诉求等方面分析风景园林专业硕士培养的时代背景,以湖南农业大学培养风景园林专业硕士办学条件为基础,按照国际化应用型风景园林专业硕士人才培养要求进行改革并予以实践:围绕"一个源头、双重优化、两项提质、两化双师、三项结合、管理增效"进行教育综合改革;通过"四基地、三平台"建设,完善学位点实践条件建设;通过"风景园林+"的建设思路,凸显农业类院校风景园林教育开放性、综合性、实践性强的特征。文章希望针对农业类院校的自身特征,在专业硕士培养方面做一些有益的探索和改革,为风景园林教育添砖加瓦。 相似文献
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